[发明专利]经二氧化氯消毒剂处理的雪莲果嫩叶的培育方法

说明书

本发明涉及一种经二氧化氯消毒剂处理的雪莲果嫩叶的培育方法，包括以下步骤：S1、使用二氧化氯消毒剂预消毒处理过程；S2、接种至愈伤诱导培养基中进行培育。其中S1包括如下步骤：P1、选取雪莲果嫩叶经流水冲洗30min；P2、使用无菌滤纸吸干雪莲果嫩叶表面的水分；P3、将P2中的雪莲果嫩叶置于二氧化氯溶液中浸泡25min，期间不时摇动。其中S2包括如下步骤：Q1：将P3中的雪莲果嫩叶吸干表面水分后接种于愈伤诱导培养基中；Q2：将Q1中的雪莲果嫩叶置于22℃黑箱培养20天。使用二氧化氯作为雪莲果嫩叶的消毒剂，二氧化氯对微生物细胞壁有很强的吸附穿透能力，并且不产生发散性有机氯化物。

技术领域

本发明涉及一种植物外植体的培育方法，更具体的说，它涉及经二氧化氯消毒剂处理的雪莲果嫩叶的培育方法。

背景技术

雪莲果含有丰富的寡聚果糖和人体必须氨基酸和酚酸、类黄酮和砧类物质，具有防治血管老化,预防骨质疏松,抗菌等作用。但是雪莲果的常规繁殖方式周期长，成本较高。

使用雪莲果嫩叶和腋芽进行再生体系的建立，为雪莲果开展快速繁殖提供进一步研究基础。其中，外植体表面消毒是植物组织培养中试验材料转化为无菌状态的第一环节。目前植物组培中最常用的消毒剂为氯化汞，但是汞为重金属元素，对环境和人体都有较大的负面影响，同时汞消毒废液严禁排入地下水道，其无害化处理过程繁琐。

发明内容

本发明的目的在于提供一种经二氧化氯消毒剂处理的雪莲果嫩叶的培育方法，其中包括使用二氧化氯作为雪莲果嫩叶的消毒剂，二氧化氯对微生物细胞壁有很强的吸附穿透能力，并且不产生发散性有机氯化物。

本发明的上述目的是通过以下技术方案得以实现的：一种经二氧化氯消毒剂处理的雪莲果嫩叶的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、使用二氧化氯消毒剂预消毒处理过程，具体如下：

P1、选取雪莲果嫩叶经流水冲洗30min；

P2、使用无菌滤纸吸干雪莲果嫩叶表面的水分；

P3、将P2中的雪莲果嫩叶置于二氧化氯消毒剂中浸泡25min，期间不时摇动；S2、接种至愈伤诱导培养基中进行培育，具体如下：

Q1、将P3中的雪莲果嫩叶吸干表面水分后接种于愈伤诱导培养基中；

Q2、将Q1中的雪莲果嫩叶置于22℃黑箱培养20天。

采用以上技术方案，选取一定量的雪莲果嫩叶之后，使用流水冲洗雪莲果嫩叶叶片表面，除去叶片表面的浮尘。由于所选雪莲果嫩叶组织比较嫩，其表面存在很多绒毛，为了尽可能不破坏雪莲果嫩叶的表面同时除去其表面吸附的浮尘，在流水下冲洗30min。冲洗完成后，使用无菌滤纸将雪莲果嫩叶表面残留的水分吸除，保持雪莲果嫩叶表面干爽。之后将雪莲果嫩叶置于二氧化氯消毒剂中浸泡，如果浸泡时间太短，二氧化氯不能很好的浸润雪莲果嫩叶，消毒效果较差。如果浸泡时间太长，虽然具有较好的消毒效果，但是占用时间太长，效率较低。经过多次试验，在二氧化氯溶液中浸泡25min，既可以保证消毒彻底，又不会占用太多时间。此外，使用二氧化氯对雪莲果嫩叶消毒之后，不需要使用无菌水进一步冲洗，二氧化氯逐步挥发，雪莲果嫩叶无任何有害物质残留。

雪莲果嫩叶经过二氧化氯消毒之后，不需要使用无菌水冲洗，使用无菌滤纸吸干表面的水分，保持其表面干爽，之后即可直接将其接种于愈伤诱导培养基中进行培养，并且于22℃避光培养20天，就可以进行雪莲果的后期培植。

进一步地，P1中的水流速度为60mL/min。

采用以上技术方案，水流速度保持在60mL/min，若水流速度太慢，不易冲洗掉雪莲果嫩叶表面的浮尘，若水流太快，可能破坏雪莲果嫩叶的表面组织。

进一步地，P3中的二氧化氯消毒剂的浓度为10-20mg/L。。