[发明专利]一种稳定的HRP酶促化学发光底物液

说明书

本发明公开了一种稳定的HRP酶促化学发光底物液，包括由特定比例的鲁米诺或鲁米诺衍生物或鲁米诺钠盐，增强剂为对碘苯酚，协同增强剂为酚酞，以及缓冲液配制而成的发光剂溶液和由特定比例的过氧化脲，乙二胺四乙酸二钠，吐温‑20，以及缓冲液配制而成氧化剂溶液，在使用前将发光剂溶液和氧化剂溶液混合后使用。该HRP酶促化学发光底物液，配置简单，采用对碘苯酚作为增强剂，酚酞作为协同增强剂，吐温‑20作为稳定剂，进一步提高发光液的稳定性，获得一种稳定的、高信噪比、高灵敏度的、平台期长的、紫红色的HRP酶促化学发光底物液。

技术领域

本发明涉及免疫分析领域，具体而言，涉及一种以HRP为酶促反应的检测体系的化学发光底物液。

背景技术

化学分析免疫法(chemiluminescence immunoassay，CLIA)是将发光分析和免疫反应相结合，而建立起来的一种新的检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术，它既具有免疫反应的特异性，又具有化学发光反应的高灵敏性。它克服了放射性免疫(RIA)因使用放射性同位素而引起的放射性危害及污染问题；克服了荧光免疫分析(FIA)中所需仪器复杂，背景干扰大的缺点。以其高的灵敏度、低的仪器价格、使用简便、安全、无放射性污染等独特的优势，倍受人们的青睐，成为标记免疫的一个重要方向。其中以吖啶酯(AE)，碱性磷酸酶(ALP)和辣根过氧化物酶(HRP)为标记物的化学发光免疫分析为主要发展趋势。

鲁米诺(Luminol)、异鲁米诺(Isoluminol)及其衍生物是最早在化学发光法中使用的化学发光物质。鲁米诺化学名3-氨基邻苯二甲酰胼，最早由Albrecht报道其发光特性。这类物质通过氧化产生α-羟基过氧化物的中间体，该中间体的分解可释放出光能，所发光的性质与反应系统的pH值有关。鲁米诺类化合物的氧化步骤与溶剂组分有关，在质子溶剂中，需要酶来催化各种氧的衍生物氧化鲁米诺；在非质子溶剂中，化学发光只需要氧气和一种强碱；而强的碱性对酶的活性会产生一定的抑制作用，因此利用鲁米诺-过氧化氢-辣根过氧化物酶直接测定生物大分子灵敏度低。

现在市场上普遍用的发光底物稳定性差、本底偏高；发光剂溶液和氧化剂溶液混合后极其不稳定；发光液无色，不利于加样，影响板式化学发光手工操作从而影响实验的重复性，使用成本偏高，这些严重限制了化学发光免疫检测的应用，针对这些问题，我们对其配方进行了研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种稳定的HRP酶促化学发光底物液，以解决现有化学发光底物稳定性差、本底偏高、结果不准确、成本高等问题。

本发明采用以下技术方案：

一种稳定的HRP酶促化学发光底物液，包括发光剂溶液和氧化剂溶液，其中，所述发光剂溶液为含有终浓度为0.5～10mmol/L的鲁米诺或鲁米诺衍生物或鲁米诺钠盐，0.5～10mmol/L的对碘苯酚，0.01～5mmol/L的酚酞，以及pH为8.5～10.5的缓冲液；

所述氧化剂溶液为含有终浓度为0.5～10mmol/L的过氧化脲，质量浓度为0.01～0.1％的乙二胺四乙酸二钠，体积比为0.05～0.5％的吐温-20，其pH为4.5～6.5的柠檬酸缓冲液；

在使用时，将所述发光剂溶液和所述氧化剂溶液混合后使用。

如上所述的HRP酶促化学发光底物液，优选地，所述发光剂溶液的缓冲液为0.1mol/L～0.3mol/L硼酸-硼砂缓冲液，所述氧化剂溶液中的柠檬酸缓冲液终浓度为0.1mol/L～0.3mol/L。

如上所述的HRP酶促化学发光底物液，优选地，所述发光剂溶液为含有终浓度为1mmol/L的鲁米诺，1～2mmol/L的对碘苯酚，0.1～0.2mmol/L的酚酞，以及0.2mol/L硼酸-硼砂缓冲液，其pH为9.0～10.0。