[发明专利]一种采用分级培养基进行甘薯组织培养的方法

说明书

技术领域

本发明涉及甘薯组织培养的领域，尤其涉及一种采用分级培养基进行甘薯组织培养的方法。

背景技术

甘薯是我国四大主要粮食作物之一，也是饲料和轻工业的重要原料。随着我国生产的发展和人们食物结构的改变，甘薯作为集能源、食品加工、保健和药用、出口创汇等功能于一身的经济作物，越来越受到人们的关注。甘薯是一种杂种优势作物，但采用营养繁殖常会导致甘薯病毒病传播蔓延，致使产量和质量下降。

发明内容

本发明旨在解决现有技术的不足，而提供一种采用分级培养基进行甘薯组织培养的方法。

本发明为实现上述目的，采用以下技术方案：

一种采用分级培养基进行甘薯组织培养的方法，具体步骤为：

(1)外植体的建立：

取甘薯叶片用自来水冲洗，然后在洗衣粉溶液中浸泡5-10min，再用自来水冲洗干净，置于超净台上进行消毒，消毒完成后将叶片切成0.5cm×0.5cm的小方块备用；

(2)愈伤组织的诱导：

将经过消毒处理的甘薯叶片接种于诱导培养基MS+KT 2mg/L+2,4-D0.5mg/L上进行暗培养15天；或者将经过消毒处理的甘薯叶片接种于诱导培养基MS+KT 2mg/L+NAA 0.5mg/L上进行光培养12天；

(3)愈伤组织的分化：

将接种于诱导培养基MS+KT 2mg/L+2,4-D 0.5mg/L上的愈伤组织转接于分化培养基MS+KT 1mg/L+BA 1mg/L+IAA 0.5mg/L+GA₃ 0.1mg/L上进行光培养45天；或者将接种于诱导培养基MS+KT 2mg/L+NAA 0.5mg/L上愈伤组织直接进行光培养45天；

(4)试管苗的增殖和生长：

将诱导分化出的试管苗切成带1个腋芽的茎段转接至MS增殖培养基上进行增殖生长；

(5)试管苗的生根：

将经过增殖生长的试管苗接种于1/2MS生根培养基上进行生根；

(6)生根试管苗的移栽：

待试管苗根长1.2cm时，在温室自然光下炼苗2天，再揭开封口膜3天，用无菌水洗去根部培养基，移栽入大棚里，保温保湿生长。

外植体的建立过程中，甘薯叶片在超净台上进行消毒的过程为：将甘薯叶片在75％的酒精中浸泡，浸泡时间为30-40s，用无菌水冲洗5-8次；然后用1％的HgCl₂溶液进行消毒15min，用无菌水冲洗5-8次；最后用无菌纸吸干叶片表面水分。

试管苗的生根过程中，生根培养基1/2MS的pH为5.8-6.0，琼脂0.7％，同时采用3％白糖和自来水。

本发明的有益效果是：本发明采用了分级培养基对甘薯进行组织培养，代替传统的营养繁殖，这样能够尽量避免病毒繁殖；不同阶段采用不同的培养基进行培养，为甘薯快繁和大规模试管苗商业化生产提供了科学依据。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明：

实施例1：

一种采用分级培养基进行甘薯组织培养的方法，具体步骤为：

(1)外植体的建立：

取甘薯叶片用自来水冲洗，然后在洗衣粉溶液中浸泡5min，再用自来水冲洗干净，置于超净台上进行消毒，消毒完成后将叶片切成0.5cm×0.5cm的小方块备用；

(2)愈伤组织的诱导：

将经过消毒处理的甘薯叶片接种于诱导培养基MS+KT 2mg/L+2,4-D0.5mg/L上进行暗培养15天；

(3)愈伤组织的分化：

将接种于诱导培养基MS+KT 2mg/L+2,4-D 0.5mg/L上的愈伤组织转接于分化培养基MS+KT 1mg/L+BA 1mg/L+IAA 0.5mg/L+GA₃ 0.1mg/L上进行光培养45天；

(4)试管苗的增殖和生长：

将诱导分化出的试管苗切成带1个腋芽的茎段转接至MS增殖培养基上进行增殖生长；

(5)试管苗的生根：

将经过增殖生长的试管苗接种于1/2MS生根培养基上进行生根；

(6)生根试管苗的移栽：

待试管苗根长1.2cm时，在温室自然光下炼苗2天，再揭开封口膜3天，用无菌水洗去根部培养基，移栽入大棚里，保温保湿生长。