[发明专利]一种GATA2蛋白可结合DNA片段及在GATA2活性检测中的应用

说明书

本发明涉及一种GATA2蛋白可结合的DNA片段，其包含一个或多个GATA2蛋白结合框；还涉及该DNA片段的应用；还涉及一种用于检测细胞内GATA2转录调控活性的方法。通过使用本发明的DNA片段和方法，可直接针对性地检测细胞内GATA2的转录调控活性，而非仅仅检测其转录本或蛋白质的含量，从而使得能够更准确地分析GATA2作为转录因子在一些发育生物学和病理学发展中所起的作用。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，更特别地，涉及一种GATA2蛋白可结合的DNA片段及其在检测细胞内GATA2转录调控活性中的应用。

背景技术

GATA结合蛋白2(GATA2)由GATA2基因编码，是转录因子GATA家族成员之一。目前研究发现：GATA2对参与造血及内分泌系统肿瘤细胞的增殖与分化的基因起到重要的转录调控作用。GATA2通过其C端锌指结构，结合位于靶基因启动子、转录起始位点的上游或接近启动子区域从而发挥其生物学功能。

GATA2蛋白作为转录调节因子一直备受关注。研究表明：在实体肿瘤中，GATA2高表达与前列腺癌的预后不良及复发密切相关。除此之外，GATA2在人类乳腺癌细胞中高表达，通过抑制PTEN基因转录，促进肿瘤细胞增殖。然而，也有报道在肝细胞肝癌中，GATA2表达降低，且与肝细胞肝癌的不良预后相关。因而，GATA2可能作为不同类型肿瘤预后判断的新型预测因子。

然而，目前检测内源性GATA2仍然依靠的是Western Blot技术，这类方法虽然特异度高，但灵敏度低，而且操作复杂，检测到的只是GATA2蛋白含量的差异，并不能直接体现其活性的改变，而GATA2的活性与肿瘤的发生发展有着密切的关系，我们需要检测的不仅是GATA2的转录本或蛋白质含量，而是需要检测GATA2结合至有效位点以影响转录的活性。因此，找到一种简单可靠的检测内源性GATA2活性的方法对于GATA2的研究显得极为重要。

因此，需要设计一种新的用于检测细胞内GATA2转录调控活性的方法。

发明内容

发明人通过研究发现，GATA2蛋白结合的DNA序列存在高度的保守性，其结合的DNA核心序列为T/A(GATA)A/G。

基于以上研究，本发明提供了一种GATA2蛋白可结合的DNA片段，其包含一个或多个GATA2蛋白结合框，所述GATA2蛋白结合框的序列为5’-T/A(GATA)A/G-3’。

优选地，当包含多个GATA2蛋白结合框时，每两个相邻的GATA2蛋白结合框之间具有间隔序列。用多个结合框可提高GATA2蛋白的识别和结合效率，提高灵敏度。

优选地，所述DNA片段的序列如SEQ ID NO:1所示。在研究过程中，我们试验了多种组合，结果发现该序列的DNA片段比其他组合方式对GATA2蛋白的结合效率更高。

本发明还提供了上述DNA片段在检测细胞内GATA2转录调控活性中的应用。

本发明还提供了一种用于检测细胞内GATA2转录调控活性的方法，其包括以下步骤：

S1：将包括上述DNA片段以及连接于所述DNA片段下游的报告基因表达框的报告基因系统导入所述细胞；

S2：通过检测所述报告基因的表达来计算所述细胞内GATA2转录调控活性。可将报告基因的表达强度作为指示GATA2转录调控活性的指标。

优选地，所述报告基因系统为双荧光素酶报告基因系统，包括重组质粒和对照质粒，并且所述重组质粒带有所述DNA片段以及连接在所述DNA片段下游的荧光素酶I的表达框，所述对照质粒带有荧光素酶II的表达框，所述荧光素酶I与所述荧光素酶II激发产生的荧光波长不同。将GATA2转录调控活性表示为荧光素酶I激发产生的荧光强度与荧光素酶II激发产生的荧光强度的比值。