[发明专利]一种ASE‑HPLC法测定银杏叶中总黄酮含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC法测定银杏叶中总黄酮含量的方法。

背景技术

银杏叶，为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L.的干燥叶。秋季叶尚绿时采收，及时干燥。一般为人工栽培。栽培地区北至辽宁，南达广东，东起浙江，西达陕西、甘肃、西南到四川、贵州、云南等地。

具有活血化瘀，通络止痛，敛肺平喘，化浊降脂的功效；用于瘀血阻络，胸痹心痛，中风偏瘫，肺虚咳喘，高脂血症。

银杏叶主要的药理作用的有效成分为黄酮类化合物，且含量较高。此类化合物具有防止心血管疾病的功能。

但现如今还未有对银杏叶中的总黄酮的含量测定有系统的报道。

发明内容

针对上述不足，本发明旨在提供一种重现性好、干扰因素少、方便快捷的测定银杏叶中总黄酮含量的ASE-HPLC法。

为了实现上述技术效果，本发明提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC法测定银杏叶中总黄酮含量的方法，依次包括下述步骤：

步骤1：采用ASE萃取法分别用正己烷和甲醇萃取粉碎后的银杏叶，并收集甲醇提取液后经盐酸处理得甲醇萃取液；

步骤2：采用HPLC法测定甲醇萃取液中总黄酮的含量。

进一步的，所述的步骤1包括下述子步骤：

步骤S1：将银杏叶粉碎，取1g与1g硅藻土混合，并将其装于放有纤维滤膜的ASE萃取池中，并加硅藻土至与池口平行；

步骤S2：用正己烷萃取，收集药渣；

步骤S3：用20ml甲醇对药渣进行萃取，收集萃取液；

步骤S4：用甲醇将萃取液定容至25ml，作为备用液；

步骤S5：取20ml备用液与5ml 25％盐酸溶液混合，加热回流30min；

步骤S6：冷却后，用甲醇将其定容至50ml，得甲醇萃取液。

进一步的，步骤S2所述的萃取参数为：萃取温度为80℃，萃取时间为5min，萃取次数为1次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。

进一步的，步骤S3所述的萃取参数为：萃取温度为120℃，萃取时间为5min，萃取次数为2次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。

进一步的，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为ACE,UltraCore Super C18；柱温为40℃；流速为0.3mL/min；流动相为甲醇-0.4％磷酸溶液；检测波长为360nm。

进一步的，所述的色谱柱的规格为：2.1*75mm，2.5μm。

进一步的，流动相所述的甲醇-0.4％磷酸溶液的体积比为40：60。

与传统方法相比，本发明具有以下优势：

1.本发明参考药典方法，先用正己烷除杂，再用甲醇提取，获得良好的实验结果。

2.本发明采用对一个样品进行多次萃取，并且萃取液收集到不同的收集瓶中以考察静态循环次数(1次、2次、3次)。此外，采用单因素考察方式，考察了萃取温度(80℃、100℃、120℃)、静态萃取时间(5min、8min、10min)等条件下的萃取效果，结果在提取温度120℃，提取时间5min，静态循环次数2次的条件下，获得最优结果。

3.本发明提高了温度降低溶剂的黏度，减少溶剂进入样品基体的阻止，增加了溶剂进入样品基体的扩散，降低溶剂和样品基体之间的表面张力，使溶剂溶解待测物的容量增加。

4.由于液体对溶质的溶解能力远大于气体对溶质的溶解能力，萃取液体的沸点随压力升高而提高，从而使溶剂在高温高压下仍保持在液态。

附图说明

图1为表1为槲皮素的浓度(μg)-峰面积的线性回归图；

图2为山奈素浓度(μg)-峰面积的线性回归图；

图3为异鼠李素浓度(μg)-峰面积的线性回归图；

图4为槲皮素对照品、山柰素对照品、异鼠李素对照品的总色谱图；

图5为快速溶剂萃取法提取样品的色谱图；

图6为药典方法提取样品的色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。

实施例1

1仪器设备及试剂

1.1仪器：

电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、Thermo U3000UHPLC液相色谱仪