[发明专利]一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法，属于卫生健康与食品安全检测领域。

背景技术

在细菌性食物中毒临床病例中，沙门氏菌引起的食物中毒常居榜首，是引起急性胃肠炎的主要病原菌之一，其可导致人畜共患病，临床上病发率正逐年上升。鼠伤寒沙门氏菌是一群非适应性或泛嗜性的沙门氏菌，具有广泛的宿主，是目前世界各国分离率最高的菌型之一。鼠伤寒沙门氏菌是引起小儿肠道感染最常见的致病血清，而抗菌药物是治疗鼠伤寒沙门氏菌引起肠道感染必不可少的手段。但是不少沙门氏菌已对多种抗生素产生耐药性，并出现多重耐药性，尤其是鼠伤寒沙门氏菌。头孢菌素类抗生素是临床上应用广泛的一类抗生物，第三代头孢菌素有着独特的药效学和较低的耐药率，因而是用于治疗沙门氏菌侵袭性感染和严重腹泻最常用的药物。对鼠伤寒沙门氏菌的抑制作用原理是通过与细菌内膜上青霉素结合蛋白PBPs相结合，抑制转肽酶在细胞壁合成的最后一步交叉连接中的转肽作用，使交叉连接不能形成，影响细胞壁合成，导致细菌溶菌死亡。而耐头孢菌素鼠伤寒沙门氏菌的出现及数量的增加已引起全世界的关注，因该菌极易产生耐药性，使抗菌药物疗效较差，病程迁延不愈，成为临床治疗的难点。

近年来，由于各种抗菌药物的广泛应用，导致出现许多新型耐药菌株。某些重症感染者会因抗菌药物剂量不足延误治疗时机，或盲目的大剂量治疗造成药物中毒。在致病菌检验方面，正确、快速的报告病原菌和耐药菌成为治疗环节中的重中之重。

发明内容

鉴于背景技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法，其能解决检测过程繁琐、耗时长等问题。

为了达到上述目的，本发明提供一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法，所述样品为食品样品或临床样品中，包括以下步骤：(Ⅰ)采用鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌制作参考拉曼增强光谱，包括利用拉曼光谱仪扫上述致病菌，以得到拉曼增强光谱；(Ⅱ)利用拉曼光谱仪扫待检测的样品，以得到样品的拉曼增强光谱；(III)将样品的拉曼增强光谱与参考拉曼增强光谱进行比对，即根据拉曼光谱的特征峰峰位与强度进行定性识别，或者对样品的拉曼增强光谱与参考拉曼增强光谱中的950～1300cm^-1波段进行主成分-线性判别分析(PCA-LDA)，实现对鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的鉴别；所述鼠伤寒沙门氏非耐药菌的特征谱峰为663cm^-1、780cm^-1、875cm^-1、958cm^-1、990cm^-1、1062cm^-1、1164cm^-1和1252cm^-1；所述鼠伤寒沙门氏耐药菌的特征谱峰为663cm^-1、825cm^-1、920cm^-1、958cm^-1、990cm^-1、1062cm^-1、1210cm^-1和1252cm^-1。

在根据本发明所述的一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法，在步骤(I)之前，还包括鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌菌悬液的制备。

在根据本发明所述的一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法，所述制备包括合成拉曼增强试剂、制备细菌培养基以及配置所述菌悬液。

在根据本发明所述的一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法，主成分分析采用的软件为SPSS。

在根据本发明所述的一种用于检测识别样品中鼠伤寒沙门氏耐药菌与非耐药菌的表面增强拉曼光谱方法，拉曼光谱仪的扫描参数：激光功率为200-250mw，激发光波长为785nm，扫描光谱范围为400～1800cm^-1，积分时间为5-20s，分辨率为4cm^-1。

合成拉曼增强试剂的具体操作过程为：取10mL氯金酸溶液至圆底烧瓶中，加热搅拌至溶液微沸，然后加入1mL浓度为2％的柠檬酸三钠溶液，继续保持微沸3min，最后将圆底烧瓶冷却，得到检测用纳米金溶胶颗粒。