[发明专利]核酸结合性固相载体和核酸的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及核酸结合性固相载体和核酸的提取方法。

背景技术

近年来，由于基因利用技术的发展，基因诊断、基因治疗等利用了基因的医疗备受注目，另外，在农业和畜牧业领域也开发了很多将基因用于品种鉴别、品种改良的方法。作为用于利用基因的技术，PCR(Polymerase Chain Reaction：聚合酶链式反应)法等技术广泛普及。如今，PCR法在生物体物质的信息解析中成为必不可少的技术。

PCR法是通过对含有作为扩增对象的核酸(靶核酸)和试剂的溶液(反应液)实施热循环而扩增靶核酸的方法。热循环是对反应液循环性地实施2阶段以上的温度的处理。对于PCR法，普遍的是实施2阶段或3阶段的热循环的方法。

近年来，作为用于在PCR法中使用的前处理设备，提出了通过在试剂盒中形成液体层并使结合了核酸的磁性粒子通过来进行核酸的精制和提取的设备。

例如专利文献1中记载了一种核酸结合用磁性载体，是含有超顺磁性金属氧化物的磁性二氧化硅粒子。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开平9-19292号公报

发明内容

然而，对于专利文献1中记载的核酸结合用磁性载体，使用氧化铁作为超顺磁性金属氧化物。因此，专利文献1中记载的核酸结合用磁性载体对外部磁场的响应性不足，例如，以几Hz以上的频率改变外部磁场的施加方向的情况下，有核酸结合用磁性载体无法追随外部磁场的变化的情况。因此，对于这样的载体，例如，在清洗吸附了核酸的载体的工序中，有该载体不追随外部磁场的变化而无法高效地提取核酸的情况。

本发明的几个方式涉及的目的之一在于提供能够高效地提取核酸的核酸结合性固相载体。另外，本发明几个方式涉及的目的之一在于提供能够高效地提取核酸的核酸的提取方法。

本发明涉及的核酸结合性固相载体包含含有Fe、Cr、Si和B的非晶态金属的磁性粒子和设置于上述磁性粒子的表面的氧化硅膜。

在这样的核酸结合性固相载体中，改变外部磁场施加方向而使吸附了核酸的核酸结合性固相载体移动进行清洗的情况下，能够提高对外部磁场的变化的追随性。因此，能够根据外部磁场的变化充分清洗吸附了核酸的核酸结合性固相载体，能够高效地提取核酸。

在本发明涉及的核酸结合性固相载体中，饱和磁化强度可以为50emu/g以上。

对于这样的核酸结合性固相载体，能够追随外部磁场的变化。

在本发明涉及的核酸结合性固相载体中，饱和磁化强度可以为100emu/g～150emu/g。

对于这样的核酸结合性固相载体，能够更可靠地追随外部磁场的变化，并且能够减小核酸结合性固相载体的制造偏差。

在本发明涉及的核酸结合性固相载体中，上述磁性粒子的平均粒径可以为0.5μm～10μm。

对于这样的核酸结合性固相载体，利用PCR法对使用所述核酸结合性固相载体进行提取、精制的核酸进行基因分析时，能够减小Ct值，并且能够改变外部磁场的施加方向进行吸附于核酸结合性固相载体的核酸的清洗等的情况下，能够抑制布朗运动。

在本发明涉及的核酸结合性固相载体中，上述氧化硅膜的平均厚度可以为1nm～500nm。

对于这样的核酸结合性固相载体，能够增加每单位质量的饱和磁化强度，并且能够减小氧化硅膜的制造偏差。

在本发明涉及的核酸结合性固相载体中，上述磁性粒子可以为软磁性体。

对于这样的核酸结合性固相载体，能够具有小的矫顽力。

本发明涉及的核酸的提取方法包括如下工序：

在含有离液物质的吸附液中使本发明的核酸结合性固相载体吸附核酸的工序，

将吸附了上述核酸的上述核酸结合性固相载体配置于清洗液中，对吸附了上述核酸的上述核酸结合性固相载体进行清洗的工序，

将吸附了上述核酸的上述核酸结合性固相载体配置于洗脱液中，在上述洗脱液中洗脱上述核酸的工序；

清洗上述核酸结合性固相载体的工序是利用磁力使吸附了上述核酸的上述核酸结合性固相载体在上述清洗液中振动来进行的。

在这样的核酸的提取方法中，核酸结合性固相载体能够追随外部磁场的变化，因此能够根据外部磁场的变化对吸附了核酸的核酸结合性固相载体进行充分清洗。因此，这样的核酸的提取方法能够高效地提取核酸。

在本发明涉及的核酸的提取方法中，使上述核酸洗脱的工序可以利用磁力使吸附了上述核酸的上述核酸结合性固相载体在上述洗脱液中振动而进行。