[发明专利]一种野生白芨组织培养快速繁殖方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及植物培育繁殖技术领域，具体涉及一种野生白芨组织培养快速繁殖方法。

【背景技术】

白芨是多年生兰科植物，茎块根状白色，大个开紫色花。主要应用于止血消炎，消肿生肌，外伤出血，补肺止血，烫伤，痔疮，美容祛斑等，具有多种药用价值以及观赏价值，白芨是一种濒危野生兰科药用植物，野生白芨日趋枯竭，

白芨的种子细小，似粉末状，没有胚乳，发育不完全的胚，种子萌芽的条件苛刻，不易发芽，很难进行种子繁殖；而采用分株繁殖时，繁殖率低，繁殖速度慢，因此提供一种能够将白芨种子作为种源，缩短其育苗时间，提高出芽存活率以及植株移栽后的成活率的培育方法迫在眉睫。

【发明内容】

有鉴于此，本发明的目的在于，提供一种野生白芨组织培养快速繁殖方法，在种子培养过程中实现白芨种子的快速萌发，缩短白芨种子的培养时间，在短时间内培育出大量健壮试管苗，在移栽大田后，从施肥到防虫，均考虑环保绿色，施肥过程中不添加化肥，而采用天然安全的有机肥料，防虫过程则进行针对性的治疗，同时以防御为主，各个步骤紧密结合，相互作用，提高了野生白芨的成活率。

为了解决上述技术问题，本发明采用了如下的技术方案：

一种野生白芨组织培养快速繁殖方法，具体包括如下步骤：

(一)种子培养阶段

1)外植体的消毒：首先用流水冲洗白芨蒴果26-32min，再用洗衣粉水刷洗蒴果表面，接着用蒸馏水冲洗2-3遍，然后置于超净工作台上先用75％酒精消毒2-3min，再用3％的新洁灭浸泡3-5min，期间不停的摇动，使其消毒彻底，然后放在无菌接种盘自然风干后用无菌手术刀切开一头备用；

2)培养基的准备：以VW培养基为基础培养基，在每升基质中添加：土豆液55-65g、6-BA0.4-0.6mg、蔗糖15-25g、NAA 0.04-0.06mg、琼脂3.5-4.0g以及8-12g纯净水，其制备方法是将上述原料混合搅拌均匀后，将PH值调节至5.6-5.8，装入培养皿器，在120-123℃高温下蒸汽灭菌15-20分钟后进行冷却，得到培养基备用；

3)播种：取经高温灭菌的培养皿器，在超净工作台里按照无菌操作的要求打开培养皿器口盖，用镊子夹取经步骤1)处理的白芨蒴果，将切开的一头对准培养皿器，将镊子伸进瓶口，用镊子尖后部在皿器口壁轻轻敲击，使种子均匀撒落培养基上，盖好培养皿器口，拿出超净工作台备用；

4)培养室培养：对培养室内进行消毒后采用荧光灯进行光照，控制培养室温度为22-28℃，湿度为60-75％，光照度为1500-1800Lux，25天开始萌发，45天后小苗过密并且培养皿器内营养耗尽，45天后更换培养皿器进行分瓶，每个培养皿器内放30-35株小苗，分瓶后再经过45-50天培养即可出瓶炼苗；

5)大棚炼苗：用镊子将小苗从培养皿器中取出，用自来水将小苗根部的培养基洗净，然后种植到培养土苗盘里并喷淋定根水，待叶面干后，喷施800-1000倍液的农用链霉毒，7-15天后喷施20-30倍的沼气液，在大棚内培育3-5个月后进行移栽；

(二)移栽大田阶段

(1)播种：经大棚炼苗后，弃去黄化和发育不良的种苗，整理出健康种苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗时使其根自然展开，覆土过根茎，同时保证枝干与主根的结合部分露出土外，覆土完成后将土压实，并浇灌定根水；

(2)施肥管理：移栽大田2个月后进行初次施肥，初次施肥7-10天后对叶面喷施营养液进行追肥；所用肥料为农家肥与生态肥按照比例为1-3:2-5混合，施肥时间为每年4-8月份，每年施肥4-6次，施肥结合中耕除草进行；每1-2月用营养液进行叶面喷施一次；所述营养液是将20-30重量份的腐殖土与10-18重量份的草木灰混合后浸泡在60-80重量份的水中，浸泡2天后将其过滤，取液体加入10-15重量份的沼液混合搅拌均匀即可；

所述农家肥为家禽粪便；所述生态肥通过将20-40重量份的茶渣置于容器中，掺拌10-20重量份的花生饼、10-15重量份的稻壳和10-20重量份的新鲜土质，再浇入10-30重量份的水，然后进行堆沤，待茶渣、稻壳和花生饼腐烂后变成腐烂质土后得到的。