[发明专利]一种具有抗肿瘤活性黑虎掌菌子实体多糖SAP及其制备方法和用途

说明书

本发明公开了一种具有抗肿瘤活性黑虎掌菌子实体多糖SAP及其制备方法和用途，所述黑虎掌菌子实体多糖SAP的分子量为1.66×10⁶Da，其单糖组成按摩尔比为木糖:甘露糖:葡萄糖＝2.4:1:12.3。本发明黑虎掌菌子实体多糖SAP对肿瘤细胞具有很强的抑制活性，尤其对宫颈癌细胞(Hela)，当达到200μg/mL时，抑制肿瘤细胞活性可达到73.66％。SAP对吞噬细胞具有明显激活作用，表现出良好的免疫活性但SAP对正常细胞没有毒性，可作为新型抗肿瘤天然多糖，该法制备活性多糖SAP活性高，提取率高可广泛应用于保健食品和医药领域。

技术领域

本发明涉及一种具有抗肿瘤活性黑虎掌菌子实体多糖SAP及其制备方法和用途，属于食品加工领域。

背景技术

恶性肿瘤极大地影响和危害人类的健康，且恶性肿瘤发病率极高，是全世界人类死亡的一个主要因素。所以，肿瘤的治疗与防治是人类面临的十分严峻的问题。随着科学与技术的发展，目前在临床上常用的治疗手段有化疗，手术切除，放射疗法等。但是在做这些治疗的同时也会带来不可逆的副作用，如杀伤正常细胞以及免疫细胞，导致机体组织与器官功能衰退，免疫功能下降等。所以，寻找一种天然的，高效的，低毒性的且能提高机体免疫功能的抗肿瘤药物是全球关注的热点也是多数研究学者的研究方向。

人们对天然抗癌药物的研究逐渐深入，真菌多糖被越来越多的人关注。自1969年，Ikekawa等人从香菇子实体中分离出抗肿瘤活性的多糖后，灵芝子实体多糖，木耳多糖，灰树花多糖，冬虫多糖等均被证明有明显的抗肿瘤活性和免疫活性。2014年张莘莘等人证明黑灵芝子实体多糖PSG-1通过活化机体免疫活性及线粒体交往通路促进肿瘤细胞凋亡。2016年，Yuting Tian等人从大杯蘑菇中分离出的多糖证明其通过线粒体通路及PI3K/Akt信号通路发挥其抗肿瘤活性。

黑虎掌菌(Sarcodon aspratus)是珍稀的野生食用菌，这种菌无盖无柄，在菌体上有纤细的茸毛，呈深褐色，并有明显的黑色花纹，形如虎爪，因而得名。菌体粗壮肥大，肉质细嫩，含有丰富的胞外多糖，营养价值极高。近期有关黑虎掌菌多糖报道在日益增长。Xiao-Qiang Han等人在虎掌菌子实体中分别提取出分子质量为4.3×10⁵Da水溶性多糖HBP以及分子质量为6.7×10⁵Da水溶性多糖HCP具有明显的免疫活性。Masashi Mizuno等人在黑虎掌菌子实体中提取出褐藻素半乳糖，激活巨噬细胞释放肿瘤坏死因子(TNF-α)和一氧化氮(NO)。而在本发明发现的虎掌菌子实体多糖(SAP)未见文献报道，并且具有很强的抗肿瘤活性是食用菌多糖中少见的。

发明内容

本发明旨在提供一种具有抗肿瘤活性黑虎掌菌子实体多糖SAP及其制备方法和用途。本发明发现的虎掌菌子实体多糖SAP具有很强的抗肿瘤活性，体外抗肿瘤活性检测SAP在50μg/mL时对Hela细胞的抑制率达到52.94％，对正常细胞没有毒性，且能激活免疫细胞，并且提取率为4.8％，具有重要的学术价值和广泛的商业化应用前景。

本发明具有抗肿瘤活性黑虎掌菌子实体多糖SAP，分子量为1.66×10⁶Da，其单糖组成按摩尔比为木糖:甘露糖:葡萄糖＝2.4:1:12.3。

本发明具有抗肿瘤活性黑虎掌菌子实体多糖SAP的制备方法，包括如下步骤：

1、将黑虎掌菌子实体粉碎，过60目筛，得粉料；

2、将所得粉料100g加入800mL蒸馏水中，80℃下浸提2-3h，重复浸提3-4次，合并提取液；

3、将所得提取液浓缩至100mL，加入400mL、4℃的95％乙醇至乙醇终浓度为75％，4℃静置8-12h，5000rpm/min下离心10min，弃上清，收集沉淀；