[发明专利]多价脑膜炎球菌缀合疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种多价脑膜炎球菌缀合疫苗，其特征在于：由A群、C群、Y群和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖与重组ΔfHbp-NadA融合蛋白载体缀合而成，其中，所述重组ΔfHbp-NadA融合蛋白载体，包括重组ΔfHbp、柔性连接肽段和NadA，所述重组ΔfHbp包含fHbp可变体V1的V_A、V_B结构域以及fHbp可变体V3的V_C、V_D、V_E结构域，所述重组ΔfHbp的氨基酸序列如序列表SEQ IDNO：1所示，其核苷酸编码序列如序列表SEQ ID NO：2所示；所述柔性连接肽段的核苷酸编码序列如序列表SEQ ID NO：3所示；所述重组ΔfHbp-NadA融合蛋白载体的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示，其核苷酸编码序列如序列表SEQ ID NO：5所示，A群脑膜炎球菌采用29201菌株，C群脑膜炎球菌采用29205菌株，Y群脑膜炎球菌采用29028菌株，W135群脑膜炎球菌采用29037菌株。

2.权利要求1所述多价脑膜炎球菌缀合疫苗的制备方法，其特征在于，步骤包括：

S1、制备重组ΔfHbp-NadA蛋白；

S2、制备A群、C群、Y群和W135群Nm菌荚膜多糖；

S3、采用CDAP活化多糖后衍化结合制备多价荚膜多糖-ΔfHbp-NadA蛋白缀合疫苗。

3.权利要求2所述的多价脑膜炎球菌缀合疫苗的制备方法，其特征在于，步骤S1所述重组ΔfHbp-NadA蛋白融合蛋白载体制备还包括以下步骤：

S1a、设计引物分别扩增得到fHbp V1基因片段、fHbp V3基因片段，再以这两段基因片段为模板进行搭桥PCR扩增得到重组的ΔfHbp全长片段，回收Δfhbp基因片段和pET载体，制备重组质粒pET-ΔfHbp；

S1b、设计引物扩增得到NadA蛋白的全长CDS序列，回收NadA基因片段和重组质粒pET-ΔfHbp，制备重组质粒pET-ΔfHbp-NadA；

S1c、将重组质粒pET-ΔfHbp-NadA转化表达菌株，得到重组ΔfHbp-NadA融合蛋白载体。