[发明专利]重组ΔfHbp-NadA融合蛋白载体及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201710183433.9 | 申请日： | 2017-03-24 |
| 公开（公告）号： | CN107151270B | 公开（公告）日： | 2018-07-31 |
| 发明（设计）人： | 吴克 | 申请（专利权）人： | 武汉博沃生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;A61K39/095;A61K47/64;A61P31/04 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 熊娴;冯子玲 |
| 地址： | 430075 湖北省武汉市东湖高新区*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 fhbp nada 融合 蛋白 载体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种重组ΔfHbp-NadA融合蛋白载体，其特征在于：包括重组ΔfHbp、柔性连接肽段和NadA，所述重组ΔfHbp包含fHbp可变体V1的VA、VB结构域以及fHbp可变体V3的VC、VD、VE结构域；
所述重组ΔfHbp的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，其核苷酸编码序列如序列表SEQ ID NO：2所示；
所述柔性连接肽段的核苷酸编码序列如序列表SEQ ID NO：3所示；
所述重组ΔfHbp-NadA融合蛋白载体的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示，其核苷酸编码序列如序列表SEQ ID NO：5所示。
2.权利要求1所述的重组ΔfHbp-NadA融合蛋白载体的制备方法，其特征在于：步骤包括：
S1、设计引物分别扩增得到fHbp V1基因片段、fHbp V3基因片段，再以这两段基因片段为模板进行搭桥PCR扩增得到重组的ΔfHbp全长片段，回收Δfhbp基因片段和pET载体，制备重组质粒pET-ΔfHbp；
S2、设计引物扩增得到NadA蛋白的全长CDS序列，回收NadA基因片段和重组质粒pET-ΔfHbp，制备重组质粒pET-ΔfHbp-NadA；
S3、将重组质粒pET-ΔfHbp-NadA转化表达菌株，得到重组ΔfHbp-NadA融合蛋白载体。
3.权利要求1所述的重组ΔfHbp-NadA融合蛋白载体在制备多糖-蛋白缀合疫苗中的应用。
4.一种多价脑膜炎球菌缀合疫苗，其特征在于：A群、C群、Y群和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖与权利要求1所述的重组ΔfHbp-NadA融合蛋白载体缀合。
5.一种肺炎球菌缀合疫苗，其特征在于：肺炎球菌荚膜多糖与权利要求1所述的重组ΔfHbp-NadA融合蛋白载体缀合。
6.如权利要求5所述的肺炎球菌缀合疫苗，其特征在于：所述肺炎球菌荚膜多糖是分离提纯血清型肺炎球菌荚膜上的荚膜多糖，所述血清型肺炎球菌的血清型包括1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F、33F。
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