[发明专利]一种用于全血中循环肿瘤细胞富集和检测的二氧化硅纳米线阵列芯片及制备方法

权利要求书

1.一种用于全血中循环肿瘤细胞富集和检测的二氧化硅纳米线阵列芯片，其特征在于，所述二氧化硅纳米线阵列芯片包括：以聚二甲基硅氧烷为基底、在聚二甲基硅氧烷界面原位生长的二氧化硅纳米线阵列，以及在所述二氧化硅纳米线阵列表面修饰有特异性识别肿瘤细胞的抗体。

2.根据权利要求1所述的二氧化硅纳米线阵列芯片，其特征在于，所述二氧化硅纳米线阵列的线直径是70-300nm，长度为0.3-20μm。

3.根据权利要求1所述的二氧化硅纳米线阵列芯片，其特征在于，所述特异性识别肿瘤细胞的抗体，包括：与肿瘤细胞表面EpCAM特异性抗原结合的特异性抗体，与白细胞表面共同抗原CD45结合的特异性抗体，对循环肿瘤细胞标志物进行特异性识别的抗体，或者对肿瘤组织标志物进行特异性识别的抗体。

4.根据权利要求1所述的二氧化硅纳米线阵列芯片，其特征在于，所述特异性识别肿瘤细胞的抗体在二氧化硅纳米线上固定量不少于0.1μg/cm²。

5.一种权利要求1-4任一所述二氧化硅纳米线阵列芯片的制备方法，包括以下步骤：

(1)在正戊醇体系中，将聚乙烯吡咯烷酮、水和乙醇共混搅拌形成油包水型的微乳液，其中正戊醇、水和乙醇的摩尔比为1：0.01-3：0.01-3；

(2)将聚二甲基硅氧烷进行亲水化处理；

(3)以步骤(2)处理后的聚二甲基硅氧烷为基底，吸附步骤(1)制备得到的微乳液，在室温下，将其置于氨水和正硅酸乙酯氛围下催化制得二氧化硅纳米线阵列基底；

(4)将特异性识别肿瘤细胞的抗体固定在步骤(3)制得的二氧化硅纳米线上。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述将特异性识别肿瘤细胞的抗体固定在二氧化硅纳米线上的方法包括以下步骤：

(a)将(3-巯基丙基)三甲氧基硅烷与乙醇按体积比混合配制成浓度为5-30％的(3-巯基丙基)三甲氧基硅烷的乙醇溶液；室温下，将二氧化硅纳米线阵列基片浸泡在上述体积浓度为5-30％的(3-巯基丙基)三甲氧基硅烷的乙醇溶液中，室温下放置；取出基片，分别用乙醇和二甲基亚砜润洗，吹干；

(b)用二甲基亚砜将N-(4-马来酰亚胺丁酰基)琥珀酰亚胺配制成浓度为5-30mM的溶液，将步骤(a)吹干后得到的基片浸泡在上述浓度为5-30mM的N-(4-马来酰亚胺丁酰基)琥珀酰亚胺的溶液中，室温下放置；取出基片，分别用二甲基亚砜和磷酸盐缓冲液润洗，吹干；

(c)将链霉亲和素用磷酸盐缓冲液稀释为浓度为10-50μg/mL的链霉亲和素的磷酸盐溶液，然后将步骤(b)吹干后得到的基片浸泡在上述浓度为10-50μg/mL的链霉亲和素的磷酸盐溶液中，室温下放置；取出基片，用磷酸盐缓冲液洗涤；

(d)将特异性识别肿瘤细胞的抗体用磷酸盐缓冲液稀释至浓度为10-50μg/mL，然后滴加到步骤(c)用磷酸盐缓冲液洗涤后得到的基片的表面上，室温下放置，得到二氧化硅纳米线阵列基片的表面上固定有循环肿瘤细胞表面的特异性抗体。

7.权利要求1-4任一项所述二氧化硅纳米线芯片在全血中循环肿瘤细胞捕获中的应用。