[发明专利]检测BTK基因突变的方法、寡核苷酸及其应用

说明书

背景技术

X-染色体连锁的无丙种球蛋白血症(XLA)是一种遗传免疫缺陷病，以B淋巴细胞分化障碍为病因，多数患者在出生后不久出现反复且又严重的细菌感染、低丙种球蛋白血症、外周血B细胞的显著减少和缺乏。1993年，Vetrie等通过定位克隆的方法找到了XLA的致病基因BTK。

BTK基因包含19个外显子，其编码的蛋白由659个氨基酸残基构成，包括C末端的一个激酶区(SH1)和N末端的4个功能区(PH、TH、SH3、SH2)。研究表明，BTK蛋白参与了B淋巴细胞的分化、肥大细胞的脱颗粒、血小板的聚集和脱颗粒，也参与调节细胞凋亡。当BTK基因发生突变时，这种突变将影响其编码蛋白的正常功能而导致不同程度的XLA的发生。据目前研究表明BTK突变遍布整个BTK基因，而没有一种突变的发生率超过3％，但其中PH区域为相对的突变多发区，故对BTK基因进行PH区外显子测序对检测XLA无疑有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供检测BTK基因突变的寡核苷酸，采用PCR技术，可用于快速检测XLA患者体内的BTK基因PH区外显子突变情况。所述寡核苷酸包括至少一对扩增BTK基因PH区外显子的引物，所述至少一对扩增引物选自BTK-1F/BTK-1R、BTK-2F/BTK-2R、BTK-3F/BTK-3R、BTK-4F/BTK-4R、BTK-5F/BTK-5R，或BTK-6+F/BTK-6+R，其碱基序列为：

BTK-1F：TGTAAAACGACGGCCAGTACAGTTGAGGGGGTGGAATAG；

BTK-1R：AACAGCTATGACCATGCGGCCTCTCTAATCACCAGAAG；

BTK-2F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGAACCAAGAGGGATGAGGAT；

BTK-2R：AACAGCTATGACCATGCTTTGACTTTCCGGCTTTAGC；

BTK-3F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTCCCCCACATGACAGGTC；

BTK-3R：AACAGCTATGACCATGCAAATCTGCTGTTCCCCATC；

BTK-4F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTCTTTGGTGTATGGTGTAGCA；

BTK-4R：AACAGCTATGACCATGCAGTCTCATTTCTTGGTTCAGC；

BTK-5F：TGTAAAACGACGGCCAGTGAGCTTTTAAACGCTACATTCC；

BTK-5R：AACAGCTATGACCATGCTTTTCCTCCCGTCTATCTCCT；

BTK-6+F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCAGTTGCTTGAAGTTCACCA；

BTK-6+R：AACAGCTATGACCATGTGATTGGATTACATGGTTGCTG。

进一步地，所述寡核苷酸还包括一对测序引物M13F和M13R，其碱基序列为：

M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT；

M13R：AACAGCTATGACCATG。

进一步地，BTK-1F：BTK-1R、BTK-2F：BTK-2R、BTK-3F：BTK-3R、BTK-4F：BTK-4R、BTK-5F：BTK-5R和BTK-6+F：BTK-6+R的比值均为1。

进一步地，M13F：M13R的比值为1。

进一步地，BTK-1F、BTK-1R、BTK-2F、BTK-2R、BTK-3F、BTK-3R、BTK-4F、BTK-4R、BTK-5F、BTK-5R、BTK-6+F和BTK-6+R与M13F的比值均为3.125。

进一步地，所述寡核苷酸在辅助检测无丙种球蛋白血症中的应用。

本发明的目的还在于提供一种检测BTK基因突变的方法，包括以下步骤：

(1)抽提样本中的基因组DNA；

(2)利用至少一对扩增引物对(1)中的DNA进行扩增，获得扩增产物；

(3)利用一对测序引物M13F和M13R对(2)中的扩增产物进行测序，获得所述扩增产物的碱基序列；