[发明专利]一种检测N端脑钠肽前体的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用

说明书

本发明公开了一种检测N端脑钠肽前体的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用。所述杂交瘤细胞株3A2和4G8保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号分别为CCTCC NO：C201633和CCTCC NO：C201634，及其分泌的单克隆抗体Ab1和Ab5具有高特异性和高亲和力，能特异性结合人N端脑钠肽前体的不同抗原表位，可用于建立双抗体夹心ELISA检测方法对人血浆中N端脑钠肽前体定量检测。与进口试剂盒相比，本发明建立的双抗体夹心ELISA方法具有更大的线性范围，可在临床上用于人血浆中N端脑钠肽前体检测，对心衰诊断具有重要的指导意义，具有商业应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域。更具体地，涉及一对高特异性高亲和力抗人N端脑钠肽前体的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用。

背景技术

人N末端B型脑钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP)是心肌细胞在合成多肽类激素B型脑钠肽(BNP)过程中产生的无生物活性的，由76个氨基酸组成的直链多肽片段。健康成年人血浆中NT-ProBNP含量较低，一般低于300pg/ml。随着心室的体积和压力增高可导致血浆内NT-ProBNP值升高，升高的程度与心室扩张和压力超负荷成正比，心衰患者血浆中NT-ProBNP含量甚至高达几十个ng/ml，NT-ProBNP含量能及时、特异地反应心脏结构和功能的变化。早在2002年，国际上已经公认NT-ProBNP是测定心衰的一个划时代的具有特异性的标志物。

2002年11月19日，FDA批准罗氏诊断试剂公司(Roche Diagnostics,Inc)开发的一种用于实验室帮助诊断充血性心力衰竭新的Elecsys proBNP酶联免疫检测试剂盒上市。目前，临床上主要是采用以单克隆抗体为基础的免疫学检测方法来检测人N端脑钠肽前体，相关检测技术主要包括电化学发光、酶联免疫荧光法(ELFI)、放射免疫法(RIA)、高灵敏度的免疫放射法(IRMA)、微粒子酶免疫法(MEIA)，这些检测方法大都均依赖于国外进口大型贵重仪器试剂实现，患者使用成本高。因此，自主研发我国的NT-proBNP检测试剂盒，改变目前高端临床诊断试剂几乎完全依赖国外进口产品的状况，具有非常重要的临床应用价值和经济价值。

双抗体夹心ELISA由于其灵敏度高、特异性强，适用于同时检测多个样本，并且操作简单，不需要特殊的仪器设备等优点而得到广泛应用。本研究通过高亲和力、高特异性的抗人N端脑钠肽前体的单抗的制备，筛选能配对的抗体，结合ELISA灵敏度高、特异性强、定量准确、操作简单等特性，建立双抗体夹心ELISA检测方法，为快速可靠的人N端脑钠肽前体的免疫学检测奠定基础。

用于双抗体夹心ELISA的抗体除了具备高特异性、高亲和力之外，还要能识别同一抗原的不同表位。此外，两株抗体不仅要求能识别免疫原，而且需要能与样本中的天然抗原起反应。因此，制备的单克隆抗体的质量是成功研发双抗体夹心ELISA试剂盒的关键。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术中人N端脑钠肽前体检测技术存在的缺陷和不足，提供一对靶向人N端脑钠肽前体(N-terminal pro-brain natriureticpeptide,NT-proBNP)不同表位的鼠源性单克隆抗体，该对抗体能高亲和力、高特异性的结合人N端脑钠肽前体的不同抗原表位，建立双抗体夹心ELISA检测方法对人血浆中N端脑钠肽前体定量检测。

本发明的目的在于提供一种高特异性高亲和力结合人N端脑钠肽前体的单克隆抗体。

本发明另一目的在于提供分泌上述单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明所采取的技术方案是：

一种高特异性高亲和力结合人N端脑钠肽前体的单克隆抗体，该单克隆抗体为Ab1或Ab5，单克隆抗体Ab1和Ab5的可变区基因均包括重链可变区和轻链可变区；