[发明专利]与豌豆抗白粉病等位基因er1‑9共分离的分子标记及其应用

权利要求书

1.与豌豆抗白粉病等位基因er1-9共分离的分子标记，其特征在于，所述分子标记位于豌豆遗传图谱第VI连锁群上，与er1-9的遗传距离为0cM，用于扩增所述分子标记的3条特异性引物具有如下核苷酸序列：

正向引物序列1：TGTTATATGGGCAGGGTGGTATC

正向引物序列2：TTTTGTTATATGGGCAGGGTGGTATT

通用反向引物序列：CAAAATGTAGATTATGCTTACAATTAGTGGA。

2.用于扩增与豌豆抗白粉病等位基因er1-9共分离的分子标记的引物组合，其特征在于，其含有：

正向引物序列1：TGTTATATGGGCAGGGTGGTATC

正向引物序列2：TTTTGTTATATGGGCAGGGTGGTATT

通用反向引物序列：CAAAATGTAGATTATGCTTACAATTAGTGGA。

3.权利要求1所述的分子标记或权利要求2所述的引物组合在豌豆抗白粉病的分子标记辅助选择育种中的应用。

4.权利要求1所述的分子标记或权利要求2所述的引物组合在鉴定豌豆抗白粉病种质资源中的应用。

5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，PCR扩增待测豌豆的基因组DNA，当扩增产物长度为75bp时，待测豌豆为含有er1-9的抗白粉病豌豆；当扩增产物长度为79bp时，待测豌豆为不含有er1-9的抗白粉病或感白粉病豌豆。

6.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待测豌豆的基因组DNA；

2)以待测豌豆的基因组DNA为模板，利用特异性引物进行PCR扩增反应；所述特异性引物为：

FAM正向引物序列1：TGTTATATGGGCAGGGTGGTATC

HEX正向引物序列2：TTTTGTTATATGGGCAGGGTGGTATT

COM通用反向引物序列：CAAAATGTAGATTATGCTTACAATTAGTGGA；

3)利用KASP分析技术检测PCR扩增产物。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，步骤2)中PCR扩增反应使用的扩增体系以5μl计为：10ng/μl豌豆基因组DNA 2.0μl，KASP Master Mix 2.5μl，混合引物0.07μl，ddH₂O 0.43μl。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，步骤2)中进行PCR扩增反应的条件为：95℃热激活15分钟；95℃变性20秒，65-55℃退火和延伸25秒，10个循环，每循环降低1.0℃；95℃变性10秒，56℃退火和延伸60秒，30个循环。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，步骤3)中利用KASP分析技术检测PCR扩增产物，利用LGC系统的SNPline平台进行SNP基因型分型检测。所有含有等位基因er1-9的豌豆资源均出现在红色散点区域，该基因具有FAM标签序列；而不含有等位基因er1-9的抗白粉病和感白粉病豌豆资源均出现在蓝色散点区域，该基因具有HEX标签序列；抗感亲本杂交获得的群体中的杂合株系均出现在绿色散点区域，该基因具有FAM和HEX两种标签序列。

10.用于检测抗白粉病豌豆资源的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求2所述的特异性引物组合。