[发明专利]一种超低温与粉碎联合预处理花生壳作为生物制氢补充底物的方法

权利要求书

1.一种超低温与粉碎联合预处理花生壳作为生物制氢补充底物的方法，其特征在于：将干燥的花生壳置于超低温环境下一段时间，取出后迅速采用物理方式将其粉碎；将以上处理后的花生壳同葡萄糖厌氧发酵培养基一起置于培养瓶内，充入氮气后，高温灭菌；将上述混合葡萄糖厌氧发酵培养基中接入已活化后的厌氧产氢菌种，置于适宜条件下，进行厌氧生物发酵产氢；

具体步骤如下：

(1)花生壳经清水洗去表面灰尘后，至于烘箱内，在60℃条件下烘干至恒重；

(2)将烘干恒重的花生壳用塑料袋打包，直接置于-40℃至-80℃的超低温冰箱中，超低温冷冻24h-48h后，迅速取出置于植物粉碎机内，粉碎至颗粒大小为40-80目；

(3)在培养瓶中加入葡萄糖厌氧发酵培养基PYG及上述预处理后的花生壳，其中花生壳含量为20～100g/L-PYG，使用高纯氮气吹脱以排出氧气，并在121℃条件下灭菌15min后备用；

(4)将厌氧产氢菌种在35℃、130rpm条件下，在活化培养基中活化2-4天后，接种至上述已加入花生壳及培养基的培养瓶内，于在32-35℃，120-160rpm条件下进行厌氧产氢发酵2-3天；培养基pH值小于等于7；

所述厌氧产氢菌种是梭状芽孢杆菌G1^T。

2.根据权利要求1所述的超低温与粉碎联合预处理花生壳作为生物制氢补充底物的方法，其特征在于：活化培养基成分为：花生壳20-100g/L、蛋白胨4g/L、酵母粉1g/L、L-半胱氨酸0.5g/L、Na₂HPO₄·12H₂O 14.33g/L、KH₂PO₄ 3.63g/L、MgSO₄·7H₂O 0.37g/L。

3.根据权利要求1所述的超低温与粉碎联合预处理花生壳作为生物制氢补充底物的方法，其特征在于葡萄糖厌氧发酵培养基PYG成分为：葡萄糖10g/L、蛋白胨4g/L、酵母粉1g/L、L-半胱氨酸0.5g/L、Na₂HPO₄·12H₂O 14.33g/L、KH₂PO₄ 3.63g/L、MgSO₄·7H₂O 0.37g/L。