[发明专利]一种ASE‑HPLC法测定骨碎补中柚皮苷含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC法测定骨碎补中柚皮苷含量的方法。

背景技术

骨碎补，英文名：Drynaria fortunei。真蕨目、骨碎补科蕨类植物，全年均可采挖，除去泥沙，干燥，或再燎去茸毛(鳞片)，无臭，味淡，微涩。

骨碎补有疗伤止痛、补肾强骨、外用消风祛斑的功效，可用于跌扑闪挫、筋骨折伤、肾虚腰痛、筋骨疹软、耳鸣耳聋、牙齿松动、外治斑秃、白瘫风等的治疗。

现代药理研究也表明骨碎补具有降血脂、降低胺基糖普类抗生素的毒性和促进骨吸收等作用。柚皮苷是骨碎补的主要有效成分之一，201 5年版《中国药典》(一部)以柚皮苷作为其质量评价的指标。目前，骨碎补中柚皮苷的提取主要有煎煮法、加热回流法、索氏提取法、超声萃取法、微波辅助萃取法，测定方法有高效液相色谱法(HPLC)和薄层一紫外分光光度法，但是上述方法提取时间长、测定步骤烦琐。

发明内容

针对上述不足，本发明旨在提供一种简便、准确的ASE-HPLC法测定骨碎补中柚皮苷含量的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC法测定骨碎补中柚皮苷含量的方法，依次包括下述步骤：

步骤1：采用ASE法萃取粉碎后的骨碎补样品，并收集甲醇萃取液；

步骤2：采用HPLC法测定甲醇萃取液中柚皮苷的含量。

进一步的，所述的步骤1包括下述子步骤：

步骤S1：将骨碎补样品粉碎，过三号筛，取过筛后的样品粉末0.25g；

步骤S2：将样品粉末与1g硅藻土混合，装于放有纤维滤膜的ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行，用甲醇萃取；

步骤S3：收集萃取液，并使用甲醇定容至50ml。

进一步的，所述的步骤S2所述的萃取，参数如下：萃取池体积为10ml，萃取温度为100℃，萃取时间为8min，萃取次数为3次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s。

进一步的，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为Thermo Syncronis Dim.AQ；柱温为40℃；流速为0.3mL/min；流动相为甲醇-醋酸-水；检测波长为283nm。

进一步的，所述的色谱柱的规格为1.7μm，50×2.1mm。

进一步的，所述的流动相为体积比为35:4:65的甲醇-醋酸-水。

进一步的，ASE法所采用的仪器为美国DIONEX公司的ASE350快速溶剂萃取仪；HPLC法所采用的仪器为Thermo U3000UHPLC液相色谱仪。

本发明与传统方法相比，具有以下优势：

本发明曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，有论文提到使用60％乙醇提取柚皮苷相对含量较高，杂质较少，故对使用甲醇和60％乙醇进行了溶剂考察，结果显示甲醇与60％乙醇提取柚皮苷含量一致，且杂质峰基本相同，故采用与药典一致的提取溶剂。

由于有论文提到柚皮苷有论文提示不能回流太久，药典回流6h比3h会更低，另外炮制中沙烫的时间和温度也会对柚皮苷的含量有影响，故柚皮苷可能对热不稳定，故要对萃取温度要进行考察，且萃取时间也要考察，在上述实验基础上，我们采用3因素3水平正交实验方案L9(33)安排实验，考察了温度、时间、次数3个因素对加速溶剂萃取骨碎补中柚皮苷过程的影响，确定从骨碎补中提取柚皮苷的最佳提取工艺组合为提取温度100℃，提取时间8min，提取次数3次。

附图说明

图1为柚皮苷对照品图谱图；

图2为快速溶剂萃取的样品图谱图；

图3为药典方法提取的样品图谱图；

图4为柚皮苷以浓度(mg/ml)-峰面积进行线性回归图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。

1、仪器设备及试剂

1.1仪器：

电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、Thermo U3000UHPLC液相色谱仪；

1.2试剂(除特别注明外，本实验所用试剂均为分析纯)：

水：符合GB/T 6682规定的一级水；

甲醇(CH₄O)：色谱纯(液相色谱用)；

醋酸(CH₃COOH)：分析纯。