[发明专利]一种ASE‐HPLC法测定半枝莲中野黄芩苷含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于化学检测领域，尤其是一种ASE‐HPLC法测定半枝莲中野黄芩苷含量的方法。

背景技术

半枝莲为唇形科植物半枝莲Scutellaria barbata D.Don的干燥全草，味辛、苦，寒。归肺、肝、肾经。清热解毒，化瘀利尿。可用于疔疮肿毒，咽喉肿痛，跌扑伤痛，水肿、黄疸，蛇虫咬伤。临床多用于治疗肝癌、胃癌、肺癌等疾病，其主要有效成分是黄酮类化合物。野黄芩苷是半枝莲中一种含量较高的活性物质，《中国药典》(2015年版一部)以野黄芩苷含量作为其质量评价的重要指标，具有降低脑血管阻力，改善脑血循环、增加脑血流量及抗血小板凝集的作用，现代药理研究表明野黄芩苷对肿瘤细胞、肝癌细胞增殖及侵袭能力有明显的抑制作用。目前，半枝莲中野黄芩苷的提取方法有醇提回流法、超临界萃取法、索氏提取法、超声提取、大孔树脂纯化法等，测定方法有紫外分光光度法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、但上述方法前处理提取时间长、测定步骤繁琐。与传统方法相比，ASE突出的优点是缩短提取时间，减少溶剂消耗，提高萃取效率。

本发明采用ASE-HPLC法测定半枝莲中野黄芩苷的含量，操作简便、快速、结果准确。

发明内容

针对上述不足，本发明旨在提供一种更简便、快捷控制半枝莲药材及其配方颗粒的质量的方法，该方法采用ASE‐HPLC法测定半枝莲中野黄芩苷的含量。

为了解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是这样的：一种ASE‐HPLC法测定半枝莲中野黄芩苷含量的方法，依次包括下述步骤：

步骤1：采用ASE萃取粉碎后的半枝莲样品，其中ASE萃取方法包括先用石油醚萃取，然后再用甲醇萃取，收集甲醇萃取液；

步骤2：采用HPLC法测定甲醇萃取液中也黄芩苷的含量。

进一步的，所述的步骤1包括下述子步骤：

步骤S1：将半枝莲样品粉碎，过三号筛，取过筛后的粉末1g；

步骤S2：与1g的硅藻土混合，装于放有纤维滤膜的10mlASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行，用石油醚萃取；

步骤S3：将石油醚萃取液舍弃，加入甲醇溶液对药渣进行二次萃取；

步骤S4：收集萃取液，并加甲醇溶液定容至100ml，过滤，得甲醇萃取液。

进一步的，步骤S2所述的萃取，参数如下：萃取温度为80℃；萃取时间为5min；萃取次数为1次；冲洗体积为100％；吹扫时间为120s。

进一步的，步骤S3所述的萃取，参数如下：萃取温度为120℃；萃取时间为8min；萃取次数为3次；冲洗体积为60％；吹扫时间为60s。

进一步的，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为Thermo Syncronis C18；流动相为甲醇-醋酸-水；流速为0.3mL/min；检测波长为335nm；柱温为40℃；进样量为5μl。

进一步的，所述的色谱柱的规格为3mm×100mm，3μm。

进一步的，所述的流动相甲醇‐醋酸‐水的体积比为30:66:4。

本发明与传统方法相比，具有下述优势：

本发明与中国药典2015年版一部半枝莲药材项下的样品前处理程序比较，药典方法较繁琐、费时，仅样品提取就需要6‐7小时，花费石油醚与甲醇225ml；而本发明药材提取花费13分钟，石油醚与甲醇110ml。

本发明可准确、简便、快捷地对半枝莲中野黄芩苷进行含量测定。

附图说明

图1为提取温度的试验结果图；

图2为提取时间的试验结果图；

图3为循环次数的试验结果图；

图4为野黄芩苷线性图。

具体实施方法

下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。

实施例1

1仪器与试药

ASE350型快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)；U3000高效液相色谱仪(美国Thermo Fisher公司)，配紫外检测器，四元梯度泵，自动进样器；XA205DU型十万分之一电子天平(瑞士Mettler-Toledo公司)；ELGA PURELAB ClassicUVF净化系统。

野黄芩苷(批号：110824-201207，来源：中国食品药品检定研究院)；

甲醇为色谱纯；

石油醚(60～90℃)；

冰醋酸为分析纯；