[发明专利]一种用于睾丸输出管注射的注射针制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种注射针的制备方法，尤其是涉及一种用于睾丸输出管注射的注射针制备方法。

背景技术

转基因小鼠已是医学和生命科学研究重要的研究工具。原核显微注射法制备转基因小鼠是传统经典方法，但是其操作比较繁琐，技术要求高。精子介导法制备转基因小鼠是一种新思路，该方法成本低、操作简便、周期短。睾丸注射是精子介导制备转基因小鼠的重要方法。目前，利用该方法已成功制备了小鼠、大鼠及兔等实验动物。通过睾丸注射法，可以有效地解决当前制备转基因小鼠操作复杂、成本高和效率低等问题，将会推动转基因动物在人类疾病建模的应用。另外，睾丸注射也是曲细精管内干细胞移植的重要方法，为研究精子发生过程和男性不育发治疗提供了新思路。

睾丸输出管注射是睾丸注射的重要方法。该注射方法是将外源基因通过游离的、韧性强的输出小管注射到睾丸曲细精管内，进而转染生精细胞建立转基因精子。该注射方法操作简便可靠，而且不需要昂贵的仪器就能完成，只需要玻璃针就可以完成注射。注射针的质量对注射效率影响非常大。好的注射针不但能提高注射效率，还能减少输出管的损伤，提高制备转基因动物的成功率。所以，注射针的制备非常重要，但是目前还没有成熟的制备睾丸输出管注射针的方法。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种制备方法简单、独特，而且用本方法制成的注射针非常容易插入睾丸输出管，样品渗漏少，提高注射效率，还能减少输出管的损伤，提高制备转基因动物的成功率、减少或避免动物死亡的一种用于睾丸输出管注射的注射针制备方法。

本发明通过如下方式实现：

一种用于睾丸输出管注射的注射针制备方法，其特征在于：该方法为将外径为1mm的薄玻璃管，首先用Sutter P-1000拉针仪拉制成内径为1-3um的注射针，再用MF-900煅针仪将针尖在5um处切断，用EG-400磨针仪磨制针尖角度为30度，最后用MF-900煅针仪将斜面拉尖即可；

所述薄玻璃管是外径为1mm，内径为0.58mm，长10cm，内径含玻璃丝的玻璃管；

所述拉针仪具体参数如下：Heat：Ramp+30；Pull：10；Velocit：120；Time：0；Pressure：200；

所述针尖的磨制为将针内径5μm部位与玻璃珠刚好接触，踩下脚控开关加热，当看到玻璃针与玻璃珠刚好粘在一起时，松开脚控开关，玻璃珠即可断开玻璃管的尖端，得到内径在5μm的平口针，将得到的平口针再用EG-400磨针仪将针尖磨制成30度的斜面，将注射针固定在持针器上，并调整持针器与磨石的夹角为30度，磨削速度选择为1000r/min，显微镜下仔细观察，直到磨制出30度斜面，且边缘整齐；

所述针尖的拉尖为用MF-900将注射针头的斜面做成1-2μm的尖头，将上述注射针安装在煅针仪上，调节针尖位于玻璃珠上方，踩下脚控开关，当发现针尖端有粘在玻璃珠的迹象时，快速拉开玻璃针，并松开脚控开关。

本发明具有如下效果：

1)方法简单独特：本发明提供的方法为该方法为将外径为1mm的薄玻璃管，首先用Sutter P-1000拉针仪拉制成内径为1-3um的注射针，再用MF-900煅针仪将针尖在5um处切断，用EG-400磨针仪磨制针尖角度为30度，最后用MF-900煅针仪将斜面拉尖即可。

2)提高注射成功率高，进而减少或避免动物的死亡：动物的睾丸输出管有一定的韧性和游离性，普通注射针需要反复穿刺才能刺入睾丸输出管，对输出管造成严重损伤，导致样品渗漏，严重时会导致注射失败和动物死亡。本申请提供的方法将针尖磨制成30度的斜面，并将斜面拉尖，可以一次性刺入睾丸输出管，大大减少对输出管的损伤和样品渗漏，提高注射成功率高，进而减少或避免动物的死亡。

3)制备方法简单、成本低，有利于商业化生产：目前，国内外还未见有同类产品的生产制造。本方法不需要特殊材料，而且原材料玻璃管来源方便，只需要几分钱，成本低。另外，本方法使用仪器制备注射针，并提供了仪器的所有制备参数，保证了制备针的一致性，有利于商业化生产。

具体实施方式

一种用于睾丸输出管注射的注射针制备方法，该方法为如下步骤：

a.玻璃管的选择：选择外径为1mm，内径为0.58mm，长10cm的薄玻璃管，玻璃管内径应含细玻璃丝，可以通过毛吸作用使液体充满注射针管。玻璃管应注意防尘，避免用手直接触摸玻璃管，也不要用带有滑石粉的手套操作玻璃管。