[发明专利]一种干细胞制剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物治疗领域，特别涉及一种干细胞制剂及其制备方法和应用。

背景技术

黄斑区是视网膜的一个重要区域，位于眼后极部，主要与精细视觉及色觉等视功能有关。一旦黄斑区出现病变，常常出现视力下降、眼前黑影或视物变形。黄斑病变通常有两种类型。一种是干性黄斑病变，一种是湿性黄斑病变。湿性黄斑变性占总发病率的10％，是由于视网膜下有异常的血管生长，新生血管破裂出血，并引起疤痕组织生长，使视力突然下降，会迅速严重地影响患者的中心视力，甚至导致中心视力丧失。湿性黄斑病变的主要症状表现为：中央视力快速减弱，视物变形，纸上字句弯曲，视觉中央出现黑影或模糊区域。目前对于黄斑病变的治疗常常采用中医或临床手术等方法，但是该类方法仅能起到延缓病情，而不能起到根治的作用。此外，现有治疗方法复发率高，长期致盲率高。

目前，越来越多的研究者将骨髓间充质干细胞(BMSCs)应用于视网膜病变(ROP)的治疗。BMSCs治疗ROP的机制表现如下：1.细胞迁移聚集到损伤区域，当视网膜血管损伤后，BMSCS会产生大量的生长因子，如血管内皮生长因子、血小板衍生因子和细胞间黏附因子等，在改善血管形成微环境方面起到重要作用；2.细胞移植参与修复：①被移植的干细胞向病变组织迁移、增殖、融合而补充已经受损的神经节细胞，并与宿主的神经细胞形成紧密的的突触联系，重建神经通路，完善相应功能；②通过自分泌及旁分泌的功能，发挥其移植后神经保护及营养作用；③免疫调节作用及下调炎症反应，在一定程度上抑制相关炎性因子对视网膜血管细胞及神经组织的损伤，且减低了临床移植后相关并发症的发生概率。因此，研发一种对黄斑性病变具有良好疗效的干细胞制剂是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

发明内容

有鉴于此，本发明公开了一种干细胞制剂及其制备方法和应用，所述干细胞制剂对黄斑性病变有良好的疗效。

本发明公开了一种干细胞制剂，包括：间充质干细胞、神经样细胞和白蛋白。

作为优选，所述神经样细胞由所述骨髓干细胞诱导分化而来。

作为优选，所述间充质干细胞为第二代至第五代的间充质干细胞。

作为优选，所述间充质干细胞的含量为1×10⁶～5×10⁶个/mL。

作为优选，所述神经样细胞的含量为1×10⁶～5×10⁶个/mL。

作为优选，所述白蛋白的含量为2～15％。

本发明还公开了所述干细胞制剂的制备方法，包括以下步骤：

a1)将所述白蛋白和生理盐水混合，配制白蛋白悬液；

a2)采用步骤a1)制备得到的白蛋白制剂重悬所述骨髓间充质干细胞，得到骨髓间充质干细胞制剂；

a3)采用步骤a2)制备得到的骨髓间充质干细胞制剂重悬所述神经样细胞，得到所述干细胞制剂。

作为优选，所述白蛋白制剂的浓度为2～15％。

作为优选，所述间充质干细胞按照以下步骤获得：

(1)将骨髓进行离心分离，得到原代间充质干细胞；

(2)重悬所述原代间充质干细胞，进行培养；

(3)换液除去未贴壁细胞，加入培养基继续对所述原代间充质干细胞进行培养；

(4)对培养的细胞进行消化，得到间充质干细胞。

作为优选，所述神经样细胞由所述间充质干细胞通过诱导分化得到。

作为优选，本发明还公开了所述的干细胞制剂或根据所述的制备方法制得的干细胞制剂在治疗黄斑性病变中的应用。

综上所述，本发明公开了一种干细胞制剂及其制备方法和应用，该干细胞制剂包括骨髓间充质干细胞、神经样细胞和白蛋白。通过将骨髓间充质干细胞联合由骨髓间充质干细胞诱导分化而成的神经样细胞进行视网膜下腔移植，能够避免血液流动而造成外泌体的损失。此外，骨髓间充质干细胞可以分泌多种细胞因子直接参与损伤组织的修复，增强未损伤组织的抵抗能力，缩短组织修复时间。与此同时，神经样细胞可直接参与神经损伤组织的替代修复，缩短了分化的时间，大大减少治愈期限。因此，治疗效果明显，且不出现不可逆的眼盲。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例中原代培养的骨髓间充质干细胞的光学显微镜图；