[发明专利]一种金黄色葡萄球菌的检测方法及检测试剂盒

权利要求书

1.一种金黄色葡萄球菌的检测试剂盒，其特征在于，包括杂交缓冲液、识别双链切割单链的核酸内切酶、猝灭荧光的纳米颗粒和下列核酸序列：

核酸序列H1：依次具有A、B、C区域，其中A区域为金黄色葡萄球菌的核酸适体，C与A部分互补形成茎环结构的茎部分，A与C不互补的序列凸起于茎环结构外侧，B构成茎环结构的环部分，B中包含一段与H2的核酸内切酶识别位点互补配对的核酸序列；

核酸序列H2：具有茎环结构，H2的一端修饰基团，固定在能猝灭荧光的纳米颗粒上，另一端修饰相应的荧光基团；H2的环结构上包含有一段核酸内切酶的识别位点序列，与H1的B区域的相应序列互补。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：H1的A区域的核酸序列为5'-GCGCCCTCTCACGTGGCACTCAGAGTGCCGGAAGTTCTGCGTTAT-3'。

3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：核酸内切酶选自Nt.BbvCI、Bmtl、BseYI 、BstUI 。

4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：当核酸内切酶为Nt.BbvCI时，H2的环结构上包含有一段5'-CCTCAGC-3'的核酸内切酶识别位点序列，H1的B区域中包含一段与之互补的5'-GCTGAGG-3'序列。

5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：当核酸内切酶为Bmtl时，H2的环结构上包含有一段5'-GCTAGC-3'核酸内切酶识别位点序列，H1的B区域中包含一段与之互补的5'-GCTAGC-3'序列。

6.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：能猝灭荧光的纳米颗粒包括金纳米颗粒、石墨烯纳米颗粒、碳纳米管、银纳米颗粒，所述作为固定材料的纳米颗粒直接与H2的修饰基团结合，或是通过纳米颗粒上修饰对应的基团与H2的修饰基团结合。

7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于：H2的一端修饰巯基，固定在金纳米颗粒上；或H2的一端修饰羟基，固定在修饰了羧基的纳米颗粒上；或H2的一端修饰了生物素，固定在修饰了SA的纳米颗粒上。

8.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：荧光基团为FAM、Cy3、Cy5。

9.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒包括核酸内切酶Nt.BbvCI和下列核酸序列：

核酸序列H1:

5'-GCGCCCTCTCACGTGGCACTCAGAGTGCCGGAAGTTCTGCGTTAT-GTGCTGAGGAT-ATAACGCA-3'；

核酸序列H2: 5'-GCTACGTGATCCTCAGCACACCGTAGC-3'。

10.一种金黄色葡萄球菌的检测方法，所述检测方法不用于诊断目的，其特征在于，包括下列步骤：

（1）先用杂交缓冲液分别溶解核酸H1和H2，1μM的H2固定在纳米颗粒表面；

（2）在500 nM的H1中加入待测溶液，充分混匀，室温反应30分钟；然后加入到步骤（1）中的H2溶液中，充分混匀，室温反应30分钟；

（3）加入25 U的识别双链切割单链的核酸内切酶，充分混匀，室温反应90分钟；12000rpm离心后保留上清，用于荧光检测，激发峰为495 nm，发射峰为525 nm；根据荧光发射光强度与金黄色葡萄球菌浓度呈正相关来判断结果；

其中，杂交缓冲液、识别双链切割单链的核酸内切酶和核酸序列H1和H2如权利要求1～9任一项所述。