[发明专利]一种CYP2C19基因*2、*3、*17位点多态性检测试剂盒

权利要求书

1.一种CYP2C19基因*2、*3、*17位点的多态性检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括：PCR缓冲液，DNA聚合酶，LDR缓冲液，DNA连接酶，阳性对照，阴性对照。

2.如权利要求1所述的一种CYP2C19基因*2、*3、*17位点的多态性检测试剂盒，其特征在于：

用于扩增CYP2C19基因*17位点的上游引物序列为：

5’- GCAGTGATGGAGAAGG -3’（ SEQ ID No.1）；

用于扩增CYP2C19基因*17位点的下游引物序列为：

5’- TCAAATGGGAAAAGGG -3’（ SEQ ID No.2）；

用于扩增CYP2C19基因*3位点的上游引物序列为：

5’- ATCCCACTTTCATC -3’（ SEQ ID No.3）；

用于扩增CYP2C19基因*3位点的下游引物序列为：

5’- AACTTTGCCATCTT -3’（ SEQ ID No.4）；

用于扩增CYP2C19基因*2位点的上游引物序列为：

5’- TAAAAATTTCCCCATC -3’（ SEQ ID No.5）；

用于扩增CYP2C19基因*2位点的下游引物序列为：

5’- TCAATAAAGTCCCGAG -3’（ SEQ ID No.6）；

用于检测CYP2C19基因*17位点的三条探针序列分别为：

5’- CTTTGAGAACAGAAGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’ （ SEQ ID No.7），5’端磷酸化，3’端标记FAM荧光基团；

5’- TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTATCTCTTACATCAGAGATG -3’ （ SEQ ID No.8）；

5’- TTTTTTTTTTTTTTTTTTTATTATCTCTTACATCAGAGATA -3’ （ SEQ ID No.9）；

用于检测CYP2C19基因*3位点的三条探针序列分别为：

5’- CAGGGGGTGCTTACAATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT -3’ （ SEQ ID No.10），5’端磷酸化，3’端标记FAM荧光基团；

5’- TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTAACTTGGCCTTACCTGGATT -3’ （ SEQ ID No.11）；

5’- TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTAACTTGGCCTTACCTGGATC -3’ （ SEQ ID No.12）；

用于检测CYP2C19基因*2位点的三条探针序列分别为：

5’- GGGAAATAATCAATGATAGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT -3’ （ SEQ ID No.13），5’端磷酸化，3’端标记FAM荧光基团；

5’- TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTTATGGGTTCCT -3’ （ SEQ ID No.14）；

5’- TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTTATGGGTTCCC -3’ （ SEQ ID No.15）；

用于检测内参的两条探针序列分别为：

5’- GAATATATACCAYATTCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’ （ SEQ ID No.16），5’端磷酸化，3’端标记FAM荧光基团；

5’- TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCCAAACMTTAGTTATTCT -3’ （ SEQ ID No.17）；

引物、探针序列也可以是上述序列向前或向后延伸10～20个核苷酸的序列，或者和上述序列同源性大于85%以上。

3.如权利要求1所述的一种CYP2C19基因*2、*3、*17位点的多态性检测试剂盒，其特征在于：所述用于扩增靶基因的上下游引物使用浓度为5-20pmol，优选扩增靶基因的上下游引物使用浓度为8pmol；所述用于检测靶基因的探针使用浓度为0.5-5pmol，优选检测靶基因的探针使用浓度为1pmol；所述用于检测内参的探针使用浓度为0.5-5pmol，优选检测内参的探针使用浓度为1pmol。

4.如权利要求1所述的一种CYP2C19基因*2、*3、*17位点的多态性检测试剂盒，其特征在于：试剂盒每个测试分别取24µl PCR缓冲液，3µl DNA聚合酶，7.5µl LDR缓冲液，0.5µl DNA连接酶，由此组成的反应体系中含有10mM Tris-HCl（PH8.3），4-10mM MgSO4，0.2mM dNTPs，8pmol扩增靶基因的上下游引物，1pmol检测靶基因的探针，1pmol检测内参的探针，1-5U DNA聚合酶，0.1U-5U UDG酶，1-5U DNA聚合酶。