[发明专利]一种抗乙肝表面抗原的单抗隆抗体制备和筛选

说明书

本发明涉及一种结合乙肝表面抗原的单克隆抗体及产生该抗体的保藏编号为CCTCC No:C2016210的杂交瘤细胞株，以及抗体的制备方法和抗体在乙肝表面抗原检测试剂盒中的应用。本发明提供了能够与乙肝表面抗原结合的抗体，能够与野生型乙肝表面抗原或突变型的乙肝表面抗原结合，具有广泛的结合能力，可以有效降低假阴性检测结果，提高对乙肝肝炎病毒检测的准确性。

技术领域

本发明涉及单克隆抗体的制备以及筛选,特别是涉及能够与乙肝病毒表面抗原结合的单克隆抗体。

背景技术

乙型肝炎病毒(HBV)是一种双链DNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科，是直径约42nm的球形颗粒。具有外壳和核衣壳两部分，外壳厚7-8nm，具有S蛋白，M蛋白和L蛋白，S蛋白表面具有与病毒感染有关的乙肝表面抗原(HBsAg)。

乙型肝炎病毒是引起病毒性肝炎的最常见病原，其可以通过血液、母婴、密切接触和性接触传染，人体感染乙肝病毒后，易引起慢性乙型肝炎，进而导致肝硬化和/或肝癌。目前，全世界有约4亿慢性乙肝病毒(HBV)感染者，而中国大约有1亿携带者，高居世界第一。据统计，每年有100万～150万人死于急性或慢性HBV感染导致的肝功能衰竭、肝硬化和/或肝癌。因而预防HBV感染成为世界公共健康问题。

利用免疫学反应原理来检测样本中是否存在被分析物质的这一技术被广泛应用在各个领域。可以用该原理来检测各种生物样本(唾液、血液、尿液、血清、汗液等)中的被分析物质，以达到来检测疾病和人类的健康状况(早孕、肿瘤、传染病、毒品等)的目的。这种检测技术的根本原理是建立在免疫分子之间具有特异性结合的性能，例如抗体与抗原、半抗原/抗体，生物素与抗生素等。另外，很多这样的检测都可以在固体介质上完成，例如常用的层析试剂条、玻璃或塑料多孔盘中，免疫层析装置等。通常，在免疫特异结合分子上可以在结合一些固体颗粒或者化学物质，这样可以通过肉眼或其它仪器设备来定性、半定量或定量的得出检测结果。这种固体颗粒可以是带颜色的胶体颗粒(乳胶或金颗粒)，这种化学物质可以是带有发色基团的物质，这些物质在其它合适的条件下可以发出特定波长来显示检测结果。

由于HBV病毒变异较快，可导致HBsAg氨基酸序列和结构变异。当HBsAg结构变化后，检测突变前的抗原的抗体的免疫结合可能会出现障碍，因此，建立在抗原抗体免疫结合基础上的HBV检测容易出现假阴性结果。如果HBV未被及时检测出来，不仅乙肝携带者自身受影响，并且会导致乙肝病毒随血液、母婴、父婴、密切接触、性行为等传播。因此，应使用对野生型和突变型病毒具有较宽适应性的乙肝抗体作为原料。

单克隆抗体，是指仅由一种类型的细胞制作出来的抗体。单克隆抗体由可以制造相应抗体的免疫细胞和癌细胞融合后的细胞产生，这种融合细胞既具有癌细胞不断分裂的能力，又具有免疫细胞可以产生抗体的能力。利用抗原抗体特异性结合的免疫学方法检测乙肝表面抗原(HBsAg)，通常会使用双抗体夹心法进行检测。其中一个抗体固定在固相介质上作为包被抗体，另一个抗体上结合固相颗粒或者化学物质作为检测抗体。目前，已有关于能够同时与野生型或突变型HBsAg相结合的一对单克隆抗体的报道。例如US2004/0219154A1能够同时与野生型的和6种突变型乙肝表面抗原结合。然而，目前仍有很多突变型HBsAg未能被识别，因此，对具有同时结合野生型和突变型HBsAg的单克隆抗体具有很大的需求。

发明内容

本发明要解决的技术问题是寻求能够结合乙肝表面抗原的单克隆抗体，特别是同时结合野生型和突变型HBsAg的单克隆抗体。因此，本发明中，通过制备杂交瘤细胞株和单克隆抗体，筛选够与野生型或突变型乙肝表面抗原结合的单克隆抗体。具体的方法是采用HBsAg作为抗原，采用通用方法免疫动物，然后把免疫好的动物的免疫细胞与骨髓瘤细胞进行融合制备杂交瘤细胞；杂交瘤细胞分泌出的单克隆抗体。