[发明专利]快速检测寨卡病毒NS1蛋白的荧光定量免疫层析试纸条及其制作方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种病毒的荧光定量免疫层析试纸条及其制作方法，尤其涉及一种快速检测寨卡病毒NS1蛋白的荧光定量免疫层析试纸条及其制作方法。

背景技术

寨卡病毒(Zika Virμs)属于黄病毒科(Flaviviridae)、黄病毒属(Flavivirμs genμs)，是一种主要由伊蚊传播的虫媒病毒。该病毒于1947年在乌干达首次发现，此后多年持续发现散在病例或发生小规模疫情。但自2015年以来，由寨卡病毒引起的人类感染不断发生，美洲、西太平洋、非洲及亚洲已累计有32个国家和地区报告寨卡病毒在本地传播。

目前，寨卡病毒主要是通过荧光PCR法，通过对血液和尿液进行病毒核酸的检测。该方法检测成本较高，耗时较长且对检测人员有一定的资质要求，很难应用于大规模人群快速筛查和既往感染史的调查研究，因此，能否快速精准的检测该病毒是控制疫情的关键因素。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术的上述缺陷，提供一种快速、特异、精准检测的快速检测寨卡病毒NS1蛋白的荧光定量免疫层析试纸条，可实现现场快速定量检测。

本发明进一步要解决的技术问题是提供一种工艺简单、易操作的快速检测寨卡病毒NS1蛋白的荧光定量免疫层析试纸条的制作方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种快速检测寨卡病毒NS1蛋白的荧光定量免疫层析试纸条，包括底板，所述底板上依次设有样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，且所述样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸依次搭接；

所述结合垫上含有荧光微球标记的寨卡NS1蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的羊抗鸡抗体；

所述包被膜包含检测区和质控区，所述检测区包被有与结合垫上的荧光微球标记的寨卡NS1蛋白单克隆抗体具有不同表位的寨卡NS1蛋白单克隆抗体，所述质控区包被有鸡IgY抗体。

所述的快速检测寨卡病毒NS1蛋白的荧光定量免疫层析试纸条中，优选所述结合垫包被有终浓度为0.1-1.5mg/mL的荧光微球标记的寨卡NS1单克隆抗体、终浓度为0.5-1.5mg/mL的荧光微球标记的羊抗鸡抗体，所述荧光微球标记的寨卡NS1单克隆抗体固化后在结合垫上的含量为0.6-1.2μg/cm²；所述荧光微球标记的羊抗鸡抗体固化后在结合垫上的含量为0.4-0.6μg/cm²。

所述的快速检测寨卡病毒NS1蛋白的荧光定量免疫层析试纸条中，优选所述样品垫通过浓度为0.5～1.5mg/ml的鼠IgG包被。

所述的快速检测寨卡病毒NS1蛋白的荧光定量免疫层析试纸条中，优选所述包被膜上检测区包被有终浓度为0.5-2.0mg/ml、用量为25μl/27-29cm的寨卡NS1蛋白单克隆抗体。

所述的快速检测寨卡病毒NS1蛋白的荧光定量免疫层析试纸条中，优选所述包被膜上质控区包被有终浓度为0.5-2.0mg/ml、用量为25μl/27-29cm的鸡IgY抗体。

所述的快速检测寨卡病毒NS1蛋白的荧光定量免疫层析试纸条中，优选所述荧光微球的粒径为0.2-0.8μm，且荧光微球的激发光和发射光波长都为400～750nm。

所述的快速检测寨卡病毒NS1蛋白的荧光定量免疫层析试纸条中，优选所述样品垫为玻璃纤维材料，经Tris盐溶液浸泡处理后热烘干处理后裁切制成；所述包被膜为硝酸纤维素膜；所述结合垫为奥斯龙8964玻纤材料，并通过含有5％糖和2％吐温的Tris溶液浸泡后烘干处理并裁剪而成。

一种快速检测寨卡病毒NS1蛋白的荧光定量免疫层析试纸条的制作方法，包括以下步骤：

A、.荧光微球的清洗与活化：将荧光微球水洗离心处理后，加入吗啉乙磺酸溶液进行超声处理；接着依次加入碳二亚胺和N-羟基硫代琥珀酰亚胺溶液，室温混匀后离心处理，弃上清液，再用吗啉乙磺酸溶液重悬，重复清洗一次后超声混匀得到荧光微球悬液备用；

B、荧光微球标记抗体的制备：向步骤A活化后得到的荧光微球悬液中，分别逐滴加入寨卡NS1蛋白单克隆抗体或羊抗鸡抗体，混匀室温反应，离心清洗，沉淀用含有5％BSA的PBS溶液重悬后室温反应，离心清洗，沉淀再用含1％BSA的TBST溶液重悬，超声混匀，得到荧光微球标记的寨卡NS1蛋白单克隆抗体悬液或荧光微球标记的羊抗鸡抗体；

C、荧光标记抗体结合垫的制备：将步骤B得到两种荧光微球标记抗体混合并使用含15％糖的TBST溶液稀释，喷涂在结合垫上，烘干备用；