[发明专利]一种诱导人羊膜间充质干细胞向神经元样细胞分化的方法

说明书

本发明公开了一种诱导人羊膜间充质干细胞向神经元样细胞分化的方法，包括以下步骤：(1)淫羊藿次苷Ⅱ母液的配制；(2)诱导培养基的配制；(3)hAMSCs的分离与原代培养；(4)hAMSCs的传代培养与扩增；(5)hAMSCs表型检测；(6)hAMSCs诱导分化。本发明提供的一种诱导hAMSCs向神经元样细胞分化的方法，能够在体外高效诱导hAMSCs向神经元样细胞分化。本发明的方法无需加用生长因子诱导，仅应用淫羊藿次苷Ⅱ即可诱导hAMSCs向神经元样细胞分化，是一种通过单分子诱导剂高效诱导hAMSCs分化为神经元样细胞的方法。本发明方法具有诱导hAMSCs向神经元样细胞分化率高的特点。

技术领域

本发明涉及一种诱导人羊膜间充质干细胞向神经元样细胞分化的方法，具体属于细胞工程技术领域。

背景技术

人羊膜间充质干细胞(humman amnion-derived mesenchymal stem cells，hAMSCs)是从娩出的胎盘附属物羊膜中分离而得，具有部分胚胎干细胞的特征，表达Oct4、Nanog、SOX2等胚性标志分子，可分化为三个胚层不同类型的细胞；且因来源丰富，原为废弃物，伦理争议小，羊膜中所含羊膜间充质干细胞数量级高，为再生医学的一种新细胞资源。研究表明，采用经典的体外诱导方案或移植到损伤的组织器官，hAMSCs不但可分化为心肌细胞、胰岛细胞、肝细胞及神经元细胞等，还具有免疫原性低、不表达CD80、CD86及HLA-DR等共刺激分子的优点，并可分泌多种活性因子，发挥免疫调节、抗炎、促进血管生成，改善微环境等作用，对肝肾损伤、心肌梗死、糖尿病及神经元退行性疾病和多种自身免疫性疾病等都具有明显治疗作用，具有诱人的临床应用前景。目前国内外报道了多种诱导hAMSCs向神经元样细胞分化的方法，诸如化学诱导法、细胞因子诱导法、细胞共培养法、中药诱导法等。这些方法都需要加用生长因子诱导。因此，研究一种通过单分子诱导剂能高效率诱导hAMSCs分化为神经元样细胞的方法，显得尤为必要。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种诱导人羊膜间充质干细胞向神经元样细胞分化的方法，能够在体外高效诱导hAMSCs向神经元样细胞分化。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

一种诱导人羊膜间充质干细胞向神经元样细胞分化的方法，包括以下步骤：(1)淫羊藿次苷Ⅱ母液的配制；(2)诱导培养基的配制；(3)hAMSCs的分离与原代培养；(4)hAMSCs的传代培养与扩增；(5)hAMSCs表型检测；(6)hAMSCs诱导分化。

前述诱导人羊膜间充质干细胞向神经元样细胞分化的方法中，步骤(1)淫羊藿次苷Ⅱ母液的配制，具体为：取0.001g淫羊藿次苷Ⅱ和0.6mL～2mLDMSO，混匀后在-20℃下保存即得淫羊藿次苷Ⅱ母液。

优选地，前述诱导人羊膜间充质干细胞向神经元样细胞分化的方法中，取0.001g淫羊藿次苷Ⅱ和2mLDMSO，混匀后在-20℃下保存即得淫羊藿次苷Ⅱ母液。

前述诱导人羊膜间充质干细胞向神经元样细胞分化的方法中，步骤(2)诱导培养基的配制，具体为：取HG-DMEM加入淫羊藿次苷Ⅱ母液或淫羊藿次苷Ⅱ母液和DMSO配制成1μmol/L～10μmol/L含体积浓度为0.3％的DMSO的淫羊藿次苷Ⅱ诱导培养基。

优选地，前述诱导人羊膜间充质干细胞向神经元样细胞分化的方法中，取100mLHG-DMEM加入300μL淫羊藿次苷Ⅱ母液配制成3μmol/L含体积浓度为0.3％的DMSO的淫羊藿次苷Ⅱ诱导培养基。

前述诱导人羊膜间充质干细胞向神经元样细胞分化的方法中，步骤(3)hAMSCs的分离与原代培养，具体为：按照专利号为2011100809686的发明专利所述方法进行培养。本申请中分离和原代培养的方法，通过采用特定的酶消化浓度以及消化时间，使得hAMSCs的分离与原代培养效果最佳。