[发明专利]一种维氏、嗜水气单胞菌二联灭活疫苗及规模化制备技术

权利要求书

1.一种维氏、嗜水气单胞菌二联灭活疫苗，其特征在于，包括以下组分：维氏气单胞菌培养物灭活液和嗜水气单胞菌培养物灭活液。

2.根据权利要求1所述的哈氏、溶藻弧菌二联灭活疫苗，其特征在于：所述的维氏、嗜水气单胞菌二联灭活疫苗中，维氏气单胞菌培养物灭活液占50％，其中细菌浓度不少于25×10⁸cfu/ml；嗜水气单胞菌培养物灭活液占50％，其中细菌浓度不少于25×10⁸cfu/ml。

3.一种制备权利要求1或2所述的维氏、嗜水气单胞菌二联灭活疫苗的规模化制备技术，包括如下步骤：将维氏气单胞菌培养物灭活液，嗜水气单胞菌培养物灭活液按1:1比例混合搅拌均匀，无菌灌装，制的维氏、嗜水气单胞菌二联灭活疫苗成品。

4.根据权利要求3所述的维氏、嗜水气单胞菌二联灭活疫苗的规模化制备技术，其特征在于，包括如下步骤：

1)一级种子制备：维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌菌株分别接种营养琼脂平板，28℃培养，24小时，挑菌苔接种营养肉汤培养基，28℃，摇瓶培养18-20小时，制备一级种子液各3L；

2)二级种子制备：将两个一级种子液各自接种50L种子罐，培养基为30L产毒素培养基，28℃，30L/min的通气量，搅拌通气培养12-14小时，制备二级种子液；

3)制苗菌液培养：将二级种子液各自接种500L发酵罐，培养基为300L产毒素培养基，28℃，175L/min的通气量，搅拌通气培养12-14小时，得到制备疫苗的菌液，活菌数50×10⁸cfu/ml以上为合格；

4)菌液灭活：培养物菌液分别移至500L灭活罐，两种菌液分别加入0.30％甲醛液，37℃，灭活24小时，进行无菌检验和甲醛残留检验合格，得到维氏气单胞菌培养物灭活液和嗜水气单胞菌培养物灭活液；

5)配苗分装：分别将两种细菌培养物灭活液按1：1的比例输入1000L配苗罐，罐内混合液搅拌均匀。无菌条件下进行分装、轧盖、得到维氏、嗜水气单胞菌二联灭活疫苗成品。