[发明专利]一种S‑腺苷蛋氨酸合成酶的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于单克隆抗体生物技术领域，特别涉及一种S-腺苷蛋氨酸合成酶的单克隆抗体及其应用。

背景技术

S-腺苷蛋氨酸(SAM)，英文名为S-adenosyl-methionine，是动物、植物等生命体内重要的代谢中间物质，也是人体内一种重要的生理活性物质，参与多种生化反应(景沛,腺苷甲硫氨酸,生命的化学,1995,5:49)，如参与生物体内转甲基作用，转氨丙基作用以及转硫作用(LU S C,Regulation of hepatic glutathione synthesis Sem Liv Dis,1998,18:331-343)。现有技术大部分通过从SAM的制备方法入手来对其进行研究。

SAM是由底物L-甲硫氨酸和ATP经S-腺苷甲硫氨酸合成酶酶促合成，因此，S-腺苷甲硫氨酸合成酶是合成SAM的关键酶，在动植物体内检测S-腺苷甲硫氨酸合成酶的含量，可反映影响动植物体合成SAM的因素，也可用于检测不同动植物体含该S-腺苷甲硫氨酸合成酶的分析研究。

目前市面上并没有专门针对S-腺苷甲硫氨酸合成酶的靶向抗体，因此，在蛋白组学层面上，对于该研究领域缺乏有效的抗体工具，用于不同植物类型、不同品系或不同发育时期该酶表达能力水平的研究。

发明内容

本发明提供一种S-腺苷蛋氨酸合成酶的单克隆抗体及其应用，以解决现有技术存在的上述缺陷，本发明通过提供一个靶向蛋白研究的工具，使得对不同植物类型、不同品系或不同发育时期的蛋白表达变化及蛋白网络图谱的更深层次研究得以实现。

本发明的技术方案如下：

本发明合成S-腺苷蛋氨酸合成酶多肽，即四组‘FTKCPEEIGA’‘TDETPELMPL’‘QVTVEYYNDK’和‘VLISTQHDET’，分别以其作为免疫原，免疫小鼠得到淋巴细胞，并利用杂交瘤细胞融合技术制得融合细胞，经免疫印迹法、有限稀释法和ELISA法，得到能够产物高亲和性和高特异性的单克隆抗体的细胞株，及由该细胞株分泌的单克隆抗体，并经免疫酶联，蛋白印记，免疫共沉淀加质谱和抗体芯片检测等验证，确定最有效抗体。

一种S-腺苷蛋氨酸合成酶的单克隆抗体，所述的单克隆抗体的重链可变区序列包含SEQ ID NO.2所示的CDR1的氨基酸序列和SEQ ID NO.4所示的CDR2的氨基酸序列；和轻链可变区序列包含SEQ ID NO.6所示的CDR3的氨基酸序列。

优选为，所述的重链可变区序列的框架区依次包含SEQ ID NO.1和3所示的氨基酸序列，和所述的轻链可变区序列的框架区依次包含SEQ ID NO.5和7所示的氨基酸序列。

本发明还公开了上述的S-腺苷蛋氨酸合成酶的单克隆抗体在检测S-腺苷蛋氨酸合成酶上的应用。

优选为，S-腺苷蛋氨酸合成酶的单克隆抗体在检测动植物体内S-腺苷蛋氨酸合成酶含量的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

本发明的一种S-腺苷蛋氨酸合成酶的单克隆抗体，对S-腺苷蛋氨酸合成酶具有高亲和力和高特异性，能广泛地用于对S-腺苷蛋氨酸合成酶检测上，特别可用于检测动植物体内S-腺苷蛋氨酸合成酶含量；同时，酶含量将直接反应体内S-腺苷蛋氨酸的表达水平，该蛋白主要在肝脏内进行生化反应，并被广泛应用于酒精肝病、药物性肝损等肝病的治疗，该抗体将作为非常有效的检测手段来定期观察相关肝病患者的治愈情况。此外，在蛋白质组学研究领域，本发明的单克隆抗体提供了一个靶向蛋白研究的工具，使得对不同植物类型、不同品系或不同发育时期的蛋白表达变化及蛋白网络图谱的更深层次研究得以实现。

附图说明

图1为樱桃全蛋白裂解液与克隆号2B7anti-SAM抗体的内源蛋白印记WB验证结果示意图；

图2为樱桃全蛋白裂解液与克隆号2B7anti-SAM抗体和对照抗体的抗体芯片检测结果示意图；

图3为本发明克隆号2B7anti-SAM抗体与不同浓度S-腺苷蛋氨酸合成酶ELISA反应制得的标准曲线。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应该理解，这些实施例仅用于说明本发明，而不用于限定本发明的保护范围。在实际应用中本领域技术人员根据本发明做出的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

本发明未特别的说明，以下实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规技术手段，且所用的原料、试剂也均为市售可购买得到的商品。

实施例1一种S-腺苷蛋氨酸合成酶的单克隆抗体杂交瘤细胞的制备和抗S-腺苷蛋氨酸合成酶的单克隆抗体的制备和纯化