[发明专利]一种富油角毛藻的藻油高效提取方法

权利要求书

1.一种富油角毛藻的藻油高效提取方法，其特征在于，主要包括以下步骤：

步骤一：角毛藻培养基制备：CO(NH₂)₂(尿素)10-20mg，KH₂PO₄ 5-10mg，FeC₆H₅O₇·5H₂O 0.4-0.8mg，EDTA 3-5mg，Na₂SiO₃·9H₂O 10-12mg，NaHCO₃ 300-500mg，九二0植物生长刺激素3-5国际单位，VB₁ 0.1-0.3mg，VB₆ 0.1-0.3mg，VB₁₂ 0.05-0.09mg，柠檬酸铁铵1-2mg，ZnSO₄ 300-500mg，体积比2-4％的钼酸水溶液5-15ml，硫酸锰5-8mg，磷酸二氢钾5-15mg，氯化钾3-5mg，消毒后的海水1000mL，混合溶解后制备所述的培养基。

步骤二：角毛藻的人工快速培养：选择角毛藻藻种，通过显微镜检查无其它异类杂藻、原生动物等，将角毛藻藻种接入装有培养基的培养容器中，接种密度为2-3×10⁵cell/mL，密封培养容器并开始充气培养，培养过程中进行光照，光线照度为3000-4000lx；经过4-6天的培养，密度达4×10⁶-5×10⁶cell/mL即得到可用来提取藻油的角毛藻混合液。

步骤三：藻油高效提取：将角毛藻混合液在转速为4000-6000r/min的作用下离心10-20min，过滤收集藻类物质，然后采用挤压膨化预处理得到膨化藻泥，将膨化物料与3-5倍量的水混合得到混合液，向混合液中加入0.02倍体积的碱性蛋白酶进行酶解，酶解后离心分离得到游离油、乳状液、水解液和残渣，将乳状液调pH值为中性，干燥后水分含量为3-5％，粉碎过筛80目，然后采用超临界CO₂进行破乳萃取，然后采用0.22μm超滤膜过滤后，即得到藻油。

2.如权利要求1所述的一种富油角毛藻的藻油高效提取方法，其特征在于，所述的角毛藻藻种的选择标准为生长良好、生活力旺盛、色泽鲜艳、无沉淀及无明显附壁现象。

3.如权利要求1所述的一种富油角毛藻的藻油高效提取方法，其特征在于，所述的充气培养是指：以10-12L/min的速度充入空气和二氧化碳混合气体，体积比比例为V_空气∶V_二氧化碳＝8∶1，夜间停止充气，白天行间隔充气，即充气1小时，停1小时，重复进行。

4.如权利要求1所述的一种富油角毛藻的藻油高效提取方法，其特征在于，所述的超临界条件为挟带剂乙醇添加量为干燥后乳状液质量的16-20％，CO2流量6-10L/min，萃取压力30-50MPa，萃取时间1-3h，萃取温度35-45℃。

5.如权利要求1所述的一种富油角毛藻的藻油高效提取方法，其特征在于，所述的培养容器为圆柱形的塑料容器，圆柱直径为50-70cm，高度为100-120cm，可以加盖密封，盖子中间有带有开关的通气管，通气管连接通气系统，底部有过滤网连接的排液管道。

6.如权利要求1所述的一种富油角毛藻的藻油高效提取方法，其特征在于，所述的培养容器消毒方式为高锰酸钾消毒。

7.如权利要求1所述的一种富油角毛藻的藻油高效提取方法，其特征在于，所述的海水消毒方法为，将经过沉淀和沙滤的海水用300目的筛绢网过滤，然后给每1m³海水中加入300ml有效氯含量8-12％的次氯酸钠溶液，使海水中有效氯含量达到15-20mg/L，消毒24h后，在其中加入硫代硫酸钠30g，以中和余氯，即完成海水消毒。