[发明专利]禽流感病毒NP蛋白抗原表位多肽及其胶体金试纸盒

说明书

本发明涉及禽流感病毒NP蛋白抗原表位多肽及其胶体金试纸盒。本发明提供一种禽流感H9N2亚型病毒NP蛋白线性抗原表位多肽，抗原表位多肽具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。本发明抗原表位多肽用于制备检测禽流感病毒的制品。本发明的禽流感病毒NP蛋白B细胞抗原表位多肽的鉴定为进一步建立高效检测禽流感的方法提供了依据，同时也为研究NP蛋白的结构和功能奠定了基础。

技术领域

本发明属于动物医学生物技术领域，尤其涉及一种禽流感病毒NP蛋白抗原表位多肽及其制备的胶体金试纸盒。

背景技术

H9N2亚型禽流感病毒(AIV)是由A型流感病毒引起禽类的一种从呼吸系统到严重全身败血症等多种症状的传染病，属甲型流感病毒。1966年第一株H9N2亚型禽流感病毒被HoMee从患温和呼吸道病的火鸡中分离到。直到1994年，我国首次报道分离得到H9N2亚型禽流感，随后陆续出现相关报道。但由于H9N2亚型禽流感病毒致病性和死亡率都没有H5N1和H7H1高，感染往往不易察觉，也不受到养殖户的重视。其实H9N2亚型禽流感病毒感染可引起鸡群的产蛋下降，引发呼吸道症状并提高鸡群对其它病原的易感性。禽流感流行至今尚无法加以有效控制的主要原因是其表面蛋白极易发生变异，使人们难以弄清其变化的真正规律。

禽流感病毒属于正黏病毒科，是单股负链RNA病毒，由8个基因片段组成，可以编码12种病毒蛋白，分别为血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、核蛋白(NP)、非结构蛋白(NS1、NS2、PB1-F2和N40)、基质蛋白(M1、M2)、聚合酶复合体(PA、PB1和PB2)。NP核蛋白是一种多功能蛋白质，不仅组成病毒的核衣壳，通过形成RNP复合体来稳定vRNA使其免受外界干扰外。还在病毒的复制过程中对其基因组RNA在细胞核内外的运输及蛋白定位起着关键作用，具有免疫保护性。此外NP蛋白作为细胞免疫的靶抗原可诱导机体产生细胞毒性T淋巴细胞反应，在不同的亚型之间产生交叉免疫保护性。

在禽流感病毒的所有蛋白质中，NP蛋白由禽流感病毒第5节段的RNA编码，含1494个核苷酸，编码498个氨基酸，分子质量56KD。与病毒基因组RNA及病毒聚合酶的3个亚单位PB1、PB2和PA相连，在与病毒颗粒RNA节段的相互作用中充当骨架，形成RNP。另外NP蛋白和M蛋白共同决定了病毒的型特异性，能够影响病毒基因组的转录与复制。是能在细胞浆与细胞核间穿梭的转运蛋白，参与病毒生活周期的多个阶段。同时作为细胞多肽包括肌动蛋白、细胞核输入及输出装置所需的主要成分。所以NP蛋白在禽流感病毒生活的多个阶段中发挥着重要作用，关于它的研究具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供H9亚型禽流感病毒NP蛋白细胞抗原表位多肽，从而弥补现有技术的不足。

本发明的H9亚型禽流感病毒NP蛋白抗原表位多肽，其特征在于，所述抗原表位多肽包含有：

1)氨基酸序列为SEQ ID NO:1的多肽；

2)在1)中的氨基酸序列上取代、缺失、添加一个或几个氨基，由1)所衍生的多肽。

进一步的，本发明还提供了编码所述的抗原表位多肽的核苷酸序列。

在本发明中，优选的，所述的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

含有所述的核苷酸序列的表达载体以及含有所述表达载体的宿主细胞也应属于本发明所要求保护的范围。

本发明另一个方面是提供一种用于检测禽流感病毒NP核蛋白胶体金免疫层析试纸条。该试纸条包括：最底层的支持板，支持板上层是样品垫和其上含有金标抗体的偶联垫，含有检测线T和质控线C的NC膜和吸水垫；所述金标抗体为胶体金标记H9亚型禽流感病毒NP蛋白单克隆抗体。上述H9亚型禽流感病毒NP蛋白单克隆抗体是针对氨基酸序列为SEQID NO:1的多多肽的特异性单克隆抗体

上述试纸条中，所述胶体金微粒直径为18-25nm。