[发明专利]一种从南酸枣皮中提取纯化和分级原花色素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物功能组分领域，尤其是涉及从南酸枣皮中提取纯化和分级原花色素的方法。

背景技术

南酸枣属于无患子目漆树科南酸枣属植物，又名五眼果、山枣、山醋子和人面子等。主要分布于湖北、广东、广西、江西、福建等地，南酸枣在印度及中南半岛等一些国家和地区也有分布。南酸枣鲜果性凉，有清热、解毒、消炎、止血、止痛等功能，因南酸枣味道酸涩，其生食口感比较差，一般将其果肉加工成枣糕、果汁饮料等其他产品后食用，而加工的副产物--果皮，因得不到有效的利用而直接被丢弃，这样既造成了资源的浪费，又对环境造成了污染。有研究表明南酸枣皮中含有大量的多酚类物质，具有抗菌、抗癌、抗氧化等生理功能，是一种具有开发潜力的植物资源。如果能将这些废弃物加以合理利用，使其成为“廉价”的原料，不仅符合“低碳、绿色、环保”的时代主题，更可以在促进资源综合利用的同时，带来可观的经济效益。

原花色素是广泛存在于植物界的多酚类物质之一。大量研究结果表明其具有抗氧化、抗癌、预防和治疗心血管疾病、抗过敏及抗炎、防辐射、皮肤保健与抗皱等有益人类健康的活性功能，而这些功能与其结构组成密切相关。分离提取以及纯化分级南酸枣皮中的原花色素，研究不同的聚合度(即组成单元数目)对于原花色素功能的影响，有助于进一步了解原花色素活性功能与聚合度之间的关系，为原花色素的实际应用提供理论依据。

原花色素属于植物源类黄酮，是广泛存在于植物中的一大类由黄烷醇单体缩合而成的聚多酚类物质。根据原花色素聚合度(即组成单元的数目)可以将原花色素分为单体原花色素、低聚原花色素和高聚原花色素。单体原花色素包括黄烷-3,4-二醇和黄烷-4-醇等，低聚原花色素一般指其聚合度为2-5，高聚原花色素一般指其聚合度≥6，低聚原花色素与高聚原花色素之间并没有明显的界限。研究发现原花色素的生物活性跟其聚合度密切相关，而目前市场上只有少量原花青素二聚体的标准品可供购买，且价格昂贵，严重限制了原花色素的研究和开发。

发明内容

本发明要解决的技术问题，在于提供一种南酸枣皮中原花色素的提取纯化分级方法，操作简单，成本低，易于工业化生产、安全绿色，原花色素提取率高，纯化分级效果好，环境污染小。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：一种南酸枣皮中原花色素提取纯化分级的方法，该工艺的具体步骤如下：

(1)预处理:新鲜南酸枣经剥皮机得南酸枣皮，经冷冻干燥、低温粉碎、过60目筛得南酸枣皮粉末；

(2)提取：南酸枣粉末与体积分数为60-70％丙酮溶液按重量比体积为1g:30mL混合，在40℃下超声辅助提取20-30min，提取后的溶液在6000转每分钟条件下离心5-10min，取上清液，在40℃下旋转蒸发除去丙酮，即得南酸枣皮原花色素粗提浓缩液；

(3)纯化：采用HP2MGL型大孔吸附树脂对步骤(2)所得的南酸枣皮原花色素粗提浓缩液进行纯化：取南酸枣皮原花色素粗提浓缩液，以上样速率为1mL/min上样于大孔吸附树脂柱(2.6×30cm树脂高度26cm)上，上样结束后静置0.5h以吸附完全；再用200mL蒸馏水洗脱树脂柱，再用70％的丙酮水溶液以1.5mL/min的洗脱速度进行洗脱，收集洗脱液，浓缩冻干洗脱液得到黄褐色粉末的南酸枣皮原花色素纯化物；

(4)分级：称取步骤(3)中的南酸枣皮原花色素纯化物并将其溶解于30％甲醇水溶液中，过0.45μm滤膜后，上柱于葡聚糖凝胶LH-20层析柱并静置0.5h以吸附完全，接着用200mL浓度为30％甲醇水溶液洗脱葡聚糖凝胶LH-20层析柱；再按照表1配置洗脱液对葡聚糖凝胶LH-20层析柱进行分级洗脱，收集得到5个洗脱组分，将各个组分旋转蒸发除去有机溶剂并冻干，即为得到纯度90％的5个不同组分的原花色素。收集得到的5个组分利用酸催化降解法测定其平均聚合度。

表1葡聚糖凝胶LH-20层析柱分离原花色素洗脱顺序

本发明的优势在于：

1、制备工艺简单，利用超声辅助提取制备获得的原花色素有效成分含量高，采用丙酮水溶液来提取、洗脱原花色素对环境污染小，且价格低廉可回收，易于工业化生产。

2、制备不同聚合度原花色素，拓宽原花色素的研究，填补商业市场的空白。

3、HP2MGL型大孔吸附树脂纯化效率高，并且可再生利用，能够进一步降低生产成本。葡聚糖凝胶LH-20分级效果好，且LH-20柱可再生利用，降低成本。

具体实施方式

实施例一