[发明专利]检测人PDL1蛋白的核酸适体及其在制备检测制剂中的应用

说明书

本发明公开了一种检测人PDL1蛋白的核酸适体，其序列中含有如SEQ ID NO.1所示的序列。同现有的一些技术相比本发明的优点在于核酸适体具有与蛋白相似的亲和力和特异性而分子量小，免疫源性低，易于体外合成并修饰，稳定性好易于保存。采用本发明进行PDL1蛋白水平的检测更为简便、迅速、重现型好且极大地降低了成本。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种可用于细胞及组织水平人PDL1检测的核酸适体及其制备检测试剂的应用方法。

技术背景

传统的肿瘤治疗方法主要是手术治疗结合化疗放疗。但传统疗法存在很多不足，比如副作用大，病人往往饱受折磨；另外易复发。近年来越来越多的目光聚焦于靶向治疗、免疫治疗等新的治疗方法。

人体的免疫系统通过免疫激活和免疫抑制受体维持动态的平衡状态。以T细胞为例，免疫抑制主要是通过其表面的免疫抑制受体实现的，其中包括两个已用于临床的药物靶点CTLA-4和PD1。Programmed death protein 1(PD1)，程序性死亡受体1，可被诱导表达于多种免疫细胞包括T细胞、B细胞、树突状细胞和单核细胞等。其配体PDL1(programmeddeath ligand 1)分布比较广泛，如T/B细胞、血管内皮细胞、多种间质细胞、肝细胞、胰岛细胞、神经胶质细胞、胎盘细胞、以及多种肿瘤细胞等，预示着其在机体免疫调控中发挥重要作用。PD1与PDL1结合之后会诱导T细胞的动能耗尽、凋亡等，研究表明其参与免疫排异反应、自身免疫疾病、动脉粥样硬化、肿瘤等多种疾病。

近年来PD1/PDL1在肿瘤中的作用备受关注，目前已报道PDL1在多种肿瘤细胞中高表达，如宫颈癌、胰腺癌、泌尿上皮癌、胃癌、食管癌、非小细胞肺癌、黑色素瘤、胶质瘤、头颈部细胞癌、白血病、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、多发性骨髓瘤等。近两年多种靶向PD1/PDL1的药物纷纷开展了临床试验，包括中国的首个PDL1单克隆抗体KN035，另外目前FDA已经批准两个PD1的单克隆抗体用于临床治疗，分别是百时美施贵宝的Opdivo和默沙东的Keytruda，获批的适应症是黑色素瘤、晚期肾细胞癌和非小细胞肺癌。目前PDL1的单克隆抗体尚未上市，但罗氏、阿斯利康、默克/辉瑞等公司的PDL1抗体已经进入临床III期实验，而罗氏的Atezolizumab已经向FDA提交了膀胱癌和非小细胞肺癌的BLA申请。

新抗体的研发及上市确实鼓舞人心，然而大部分的抗体药物制作周期长、成本高、售价昂贵，且作为生物大分子往往免疫源性高，治疗往往伴随着较多的副作用。核酸适体作为化学抗体具有合成周期短、合成成本低、重复性好、稳定、易于保存、易于修饰等等优点。近年来FDA已经批准核酸适体Macugen用于治疗老年黄斑性病变，另外核酸适体RB006、AS1411也已经进入临床实验。

目前为止尚未有针对人PDL1蛋白的核酸适体报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种高特异性、稳定性、可用于人PDL1蛋白及相关样本检测的核酸适体及其制备检测试剂的应用方法。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

所述检测人PDL1蛋白的核酸适体序列中含有如SEQ ID NO.1所示的序列。

优选地，所述核酸适体序列中，与SEQ ID NO.1所示的序列两端连接的碱基被删或被人工替换。

优选地，所述核酸适体序列中，SEQ ID NO.1所示的序列进被二聚或多聚化。

优选地，所述核酸适体序列被二聚或多聚化。

优选地，所述核酸适体序列中，SEQ ID NO.1所示的序列被硫代修饰或甲基化修饰。

优选地，所述核酸适体序列被硫代修饰或甲基化修饰。

优选地，所述核酸适体序列连接上荧光物质、放射性物质、治疗性物质、生物素或被酶标记。