[发明专利]一种欧洲山杨品系组培育苗方法

说明书

本发明提供了一种欧洲山杨品系组培育苗方法，将带有腋芽的茎段依次经过酒精溶液浸泡、无菌水冲洗、消毒剂消毒和无菌水再次冲洗后，去掉茎段的两端1～2mm，得到外植体；将外植体接种到不定芽分化培养基中，分化培养30～45d，得到欧洲山杨不定芽；欧洲山杨不定芽接种到继代增殖培养基中进行继代培养，得到1.2～2.0cm高的欧洲山杨不定芽；将1.2～2.0cm的欧洲山杨不定芽转接到不定芽生根培养基中进行生根培养，得到欧洲山杨再生组培苗。采用本发明的组培育苗方法，得到组培苗的成活率为91.4～91.6％。本发明的组培育苗方法可使以一个茎段为基数，经培养一年内可增殖到10 000～100 000株组培苗。

技术领域

本发明属于农林育种方法技术领域，尤其涉及一种欧洲山杨品系组培育苗方法。

背景技术

欧洲山杨原产中国新疆的阿尔泰、塔城、天山东部北坡至西部伊犁山区，其抗寒、喜光、喜凉爽气候，在我国西北、东北的同纬度地区可广泛栽培与推广。欧洲山杨为杨属白杨派树种，在自然界中，它主要依靠种子和根蘖繁殖，种子繁殖子代性状会发生分离，不能确保优良单株性状的表现，因此生产上使用比较广泛是无性繁殖方法。无性繁殖方法包括扦插、嫁接、根蘖或组织培养等，欧洲山杨扦插生根困难，此种方法生产上难以利用，而利用嫁接或根蘖的繁殖方式，希望在1～2年内达到几万甚至几百万株苗木的生产能力，则初始繁殖材料至少达到上千株至几万株。。

而且利用“三倍体欧洲无絮山杨快速繁殖体系”中的方法进行灭菌与组织培养，在利用参考文献“三倍体欧洲无絮山杨快速繁殖体系”中的培养方法进行繁殖的过程中，主要问题如下：灭菌方法不可行，在75％酒精中约30～60秒，在0.1％的升汞中灭菌5～10分，无菌水冲洗3～5遍，褐化率达到85％～100％，褐化会导致培育苗难以成活，而褐化率越高表明培育苗的成活率就越低；利用不定芽诱导培养基MS+6-BA0.5mg/L+0.05NAAmg/L进行腋芽诱导，不定芽诱导率仅为14.2％～25.8％；对于增殖培养基MS+6-BA0.5mg/L+0.05NAAmg/L，植株增殖率为2～3倍，且生长植株平均为1.0～1.5cm，最终导致培育苗的成活率低。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于针对现有技术的不足，而提供一种欧洲山杨品系组培育苗方法，能够提高育苗的成活率。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

一种欧洲山杨品系组培育苗方法，包括以下步骤：

1)将带有腋芽的茎段依次经过酒精溶液浸泡、无菌水冲洗、消毒剂消毒和无菌水再次冲洗后，去掉茎段的两端1～2mm，得到外植体；

2)将所述步骤1)得到的外植体接种到已灭菌的不定芽分化培养基中，分化培养30～45d，得到欧洲山杨不定芽；

3)将所述步骤2)得到的欧洲山杨不定芽接种到已灭菌的继代增殖培养基中进行继代培养，得到1.2～2.0cm高的欧洲山杨不定芽；

4)将所述步骤3)得到的1.2～2.0cm的欧洲山杨不定芽转接到已灭菌的不定芽生根培养基中进行生根培养，得到欧洲山杨再生组培苗。

优选的，所述步骤1)中茎段的长度为0.5～2cm。

优选的，所述步骤1)中酒精溶液中乙醇的体积浓度为70～75％，所述酒精溶液浸泡的时间为10～20s；

所述消毒剂为氯化汞溶液，所述氯化汞溶液中氯化汞的质量浓度为0.05～0.15％，所述消毒剂消毒的时间为1.5～4.5min。

优选的，所述步骤2)中的不定芽分化培养基包括以下浓度的组分：