[发明专利]一种铁皮石斛基因组DNA的提取方法

说明书

本发明提供了一种铁皮石斛基因组DNA的提取方法，该方法包括步骤：（1）粉碎铁皮石斛叶片；（2）制备铁皮石斛DNA提取试剂，所述提取试剂的配方为：100mM Tris‑Hcl、15mM EDTA、0.7M Nacl、3%(W/V)CATB、0.4%（W/V）抗坏血酸、0.1~0.3%（V/V）β‑巯基乙醇；上述组分的溶液为水；再加入氯仿和异戊醇混合溶液，其中氯仿与异戊醇的体积比为1:1；所述混合溶液的加入体积占提取试剂总体积的1/2；（3）将步骤（1）所得物加入步骤（2）所得提取试剂中，在0~4℃下静置20~40分钟，离心，然后用乙醇水溶液进行沉淀，即得DNA。本发明用时非常少，DNA纯度高。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种铁皮石斛基因组DNA的提取方法。

背景技术

目前，对于植物DNA的提取，有很多方法，主要为CTAB和SDS法。然而，由于石斛类植物中有高含量的多糖和多酚和其它可用影响DNA提取分离的成分，使得一般的提取方法难以适应铁皮石斛DNA的提取难以获得很好的效果。

《石斛属植物基因组 DNA 提取方法的对比》对现有的CTAB和SDS进行了验证，上述方法均不能获得较好的DNA提取质量。该研究对CTAB和SDS法进行了改进，主要的改进点在于提高氯化钠和β-巯基乙醇的浓度，不过，其同样无法解决现有技术的一个难题：即提取过程需要水浴加热和后续纯化除杂问题。上述问题使得DNA的提取工作十分耗时。更为重要的是，纯化步骤若操作不当，更会容易影响DNA的提取质量。

因此，如何寻求一种无须加热同时能最大化节省纯化时间的铁皮石斛的DNA提取方法，是本领域亟待解决的技术问题。

发明内容

针对现有技术的技术缺点，本发明的目的在于提供一种铁皮石斛基因组DNA的提取方法，该方法包括如下步骤：

（1）粉碎铁皮石斛叶片；

（2）制备铁皮石斛DNA提取试剂，所述提取试剂的配方为：

100mM Tris-Hcl、15mM EDTA、0.7M Nacl、3%(W/V) CATB、0.4%（W/V）抗坏血酸、0.1~0.3%（V/V）β-巯基乙醇；

上述组分的溶液为水；

再加入氯仿和异戊醇混合溶液，其中氯仿与异戊醇的体积比为1:1；所述混合溶液的加入体积占提取试剂总体积的1/2；

（3）将步骤（1）所得物加入步骤（2）所得提取试剂中，在0~4℃下静置20~40分钟，离心，然后用乙醇水溶液进行沉淀，即得DNA。

一般而言，利用CTAB的提取液进行提取后，需要进行纯化处理。本发明直接将氯仿和异戊醇与提取液混合，组成提取试剂，直接用于铁皮石斛的DNA提取；省去了常规方法的水浴加热步骤，直接在冰浴（0~4℃）下静置，便实现了DNA的高纯度提取。

可以理解的是，本发明至少比常规方法节约了1个小时以上的提取时间，而且步骤十分的简单。

优选的，β-巯基乙醇的浓度为0.2%（V/V）。

所述乙醇水溶液中，乙醇的体积分数为70~95%。优选的，所述乙醇水溶液中，乙醇的体积分数为75%。

优选的，所述静置时间为30分钟。

本发明的优点：

1、相对于常规的方法，本发明的处理时间非常的短，整个过程不到一个小时，无需后续的除杂操作步骤，直接可以得到高纯度的DNA。

2、本发明无需加热过程，仅仅需要在0~4℃（普通冰箱冷藏室或冰上）下便可进行，十分的方便。

附图说明