[发明专利]包含TB10.4的疫苗

说明书

本申请为分案申请，其原申请的申请日为2009年7月14日，申请号为200980136013.9，名称为“包含TB10.4的疫苗”。

技术领域

本发明公开了一种具有低剂量抗原的人用疫苗，包含佐剂中的融合于抗原85-复合体(如Ag85B)的多肽的TB10.4；以及结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)的免疫和治疗方法。

背景技术

全世界正致力于开发出比当前使用的卡介苗(BCG)疫苗更有效的结核分枝杆菌疫苗，这包括不同的策略，例如活的减毒疫苗(9)、病毒载体化的结核分枝杆菌疫苗(11)和亚单位疫苗(12,14)。亚单位疫苗方法拥有诸多优点，例如，安全性和稳定性增加，以及经证实的加强之前的BCG接种的能力(4,7)。另外，由于亚单位疫苗似乎不受环境中分枝杆菌的影响，因此这类疫苗可能在发展中国家中特别有用(3)。然而，该领域的进展已因缺乏引起细胞介导的强免疫(CMI)应答的佐剂而被延误。因此，仍然需要能形成多功能免疫细胞从而提供更强的抵御结核分枝杆菌的保护作用的免疫原性组合物。

发明内容

本研究检查了作为抵御结核分枝杆菌感染的新疫苗的Ag85B-TB10.4(Hyvac 4)和佐剂的结合物。结果显示，Ag85B-TB10.4和佐剂诱导了大量的多功能CD4⁺T细胞，并提供了抵御结核分枝杆菌的显著保护作用。令人意外地是，Ag85B-TB10.4抗原和佐剂的结合物对抗原剂量敏感。因此，尽管在小鼠中的标准剂量5.0μg中的Ag85B-TB10.4不会引起抵御结核分枝杆菌的保护作用，但是0.5μg中的Ag85B-TB10.4却诱发了与BCG相当的保护作用。

具体实施方式

本发明公开了一种人用免疫原性组合物，包含TB10.4蛋白和Ag85-复合蛋白，所述TB10.4蛋白和Ag85-复合蛋白任选地可融合在一起或作为分开的蛋白提供，其中蛋白总量少于约25.0μg、优选地少于10.0μg或者等于约0.5μg/抗原剂量。

所公开的免疫原性组合物可以额外地包含佐剂。本发明的优选佐剂具有至少一种聚阳离子肽和至少一种寡核苷酸，优选地，所述寡核苷酸为TLR9激动剂。

本发明的优选佐剂为并且Ag85-复合体的优选蛋白为Ag85B蛋白。

本发明公开了一种人用疫苗，包含上述免疫原性组合物。

本发明还公开了一种在人中诱导抵御结核分枝杆菌的保护作用的方法，所述方法包括将一种如上所述的免疫原性组合物引入该人中。

本研究检查了作为抵御结核分枝杆菌感染的新疫苗的Ag85B-TB10.4(Hyvac 4)融合蛋白和的结合物。佐剂包含阳离子肽和TLR9受体激动剂。

在形成抵御结核分枝杆菌感染的有效疫苗的尝试中，Ag85B-TB10.4融合蛋白和的结合物因以下原因而具有吸引力：

(1)可促进强Th1应答；

(2)在临床试验中具有前景光明的特点；已经在临床1期试验中结合三价流感疫苗以及结合结核病疫苗对它进行了成功测试(50μg中的Ag85B-ESAT-6；临床数据尚未公布)。用中的Ag85B-ESAT6进行的动物研究记载于(1)；

(3)Ag85B-TB10.4融合蛋白具有的优点是它不含可用于诊断目的的任何蛋白例如ESAT-6。ESAT-6是一种极有价值的诊断试剂，并且是诸多商业化诊断测试的基础(5,10,13)。将ESAT-6排除在日后的疫苗之外将使得诊断测试和疫苗可平行使用，因为Ag85B-TB10.4融合蛋白不会影响任何具体的诊断测试；

(4)由于Ag85B和TB10.4两者均由BCG表达，因此本发明的疫苗还可用作BCG的加强疫苗。

结果表明，Ag85B-TB10.4和的结合物诱导了大量的多功能CD4⁺T细胞，并提供了抵御结核分枝杆菌的显著保护作用。令人意外地，Ag85B-TB10.4融合蛋白和佐剂的结合物对抗原剂量极为敏感。因此，尽管剂量为5.0μg的中的Ag85B-TB10.4不会引起抵御结核分枝杆菌的显著保护作用，但是0.5μg的中的Ag85B-TB10.4却诱发了与BCG相当的强保护作用(实施例3和图4)。相比之下，之前用其他抗原例如在MPL-DDA中的Ag85B-ESAT6的研究显示，该融合蛋白的最佳抗原剂量为大约10.0μg(16)，并且剂量为5μg的MPL-DDA中的Ag85B-TB10.4提供了与BCG相当的显著保护(8)，表明Ag85B-TB10.4是一种不寻常的免疫原性分子。