[发明专利]一种基于点击化学的铜离子检测方法及检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于点击化学的铜离子检测方法及检测试剂盒。二价铜离子在还原剂作用下被还原成一价铜离子，从而激活点击化学反应，连接两段核酸序列，磁珠分离后可进一步组装具有催化活性的催化型核酸结构，可切割底物核酸，从而使底物核酸两端的荧光基团和淬灭基团分离，通过荧光检测鉴定铜离子浓度。本发明具有较高的灵敏度，对铜离子的检测限为2 pM，检测具有很好的特异性，常见的其他干扰离子对检测不产生影响。检测过程操作简单，成本低廉，适用于实际样品中铜离子浓度的快速检测。

技术领域

本发明属于环境分析化学领域，具体涉及一种基于点击化学的铜离子检测方法及检测试剂盒。

背景技术

铜离子（Cu²⁺）是人体必需的营养元素之一，但摄入量过多又会出现中毒症状，Cu²⁺在人体富集会对大脑、肝脏、胰腺、心肌造成严重危害。人体摄取的铜主要是从水、食物及环境中获得，因此，对Cu²⁺含量的分析测定，具有非常重要意义。

常见的痕量铜的测定方法主要有石墨烯原子吸收光谱法以及电感耦合等离子体质谱法等。然而这些方法使用的仪器昂贵，需要专业的操作人员，限制了它们在基层实验室的使用。基于Cu²⁺识别的特异核酸酶序列也可用于铜离子检测，但涉及特异性核酸序列以及二级结构变换，具有较高的背景值，干扰检测灵敏度。

因此，有必要构建一种操作简单、经济便宜、灵敏度高的Cu²⁺检测方法和检测试剂盒。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种点击化学介导的形成催化型核酸用于铜离子的检测方法及检测试剂盒。

本发明所采取的技术方案是：

一种基于点击化学的铜离子检测试剂盒，包括还原剂、杂交缓冲液和下列核酸序列：

核酸序列A：A的一端修饰叠氮基团，另一端修饰有基团并固定结合在修饰有对应基团的磁珠或者胶体金；

核酸序列B：B的一端修饰炔基基团；

核酸序列C：C的两端分别与A和B互补，形成A-B-C复合物；A-B-C复合物中A修饰叠氮基团的一端靠近B修饰炔基基团的一端；

核酸序列D：D的一端与A互补，另一端与F的部分互补；D与A或F不互补的区域内包含有一段AGCGATTAAC的碱基序列；

核酸序列E：E的一端与B互补，另一端与F的部分互补；E与B或F不互补的区域内包含有一段GTTACACCCATGT的碱基序列；

核酸序列F：包含有催化核酸的识别位点TrAG，识别位点两端分别有6个碱基与D和E的一端互补；Ｆ的两端分别修饰荧光基团和相应的淬灭基团。

优选的，核酸序列A的一段修饰的基团为氨基时，固定在羟基修饰的磁珠上；如果基团为巯基，固定在胶体金上；如果基团为生物素，则固定在亲和素修饰的磁珠上。这些修饰固定有利于后续的固液分离。

优选的，C与A和B完全互补，或C的两端与A和B互补，则C中间不互补区域的碱基数不超过2个。

优选的，荧光基团包括Cy3、Cy5、FAM、HEX，相应的淬灭基团包括HBQ、Dabcyl、MGB、Eclipse。

优选的，核酸序列A、B、C、D、E、F，它们的序列以及相应的修饰基团如下所述：

A：5'-NH₂-CGAATCCTGAGT-N₃-3'（SEQ ID NO：1）；

B：5'-CH≡CH-CTACAAATACCTA-3'（SEQ ID NO：2）；