[发明专利]一种用于结核分枝杆菌感染检测的试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种用于结核分枝杆菌感染检测的试剂盒，包括如下部分：由检测引物、10倍环介导等温扩增反应液、DNA聚合酶、阳性对照、阴性对照、显色剂和菌体扩培液组成；所述的检测引物是由一对外引物F3/B3和一对内引物FIP/BIP组成。该试剂盒能够高效、快速、准确、灵敏的得到血液中结核分枝杆菌感染的检测结果，且检测结果特异性高、敏感性强，结果判断不需要使用电泳、眼易判断，非常适用于结核分枝杆菌的快速检测。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种用于结核分枝杆菌感染检测的试剂盒及检测方法。

背景技术

由人结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，Mtb)所引起的结核病是严重危害人类健康的传染病。近几十年来由于人口流动，耐药结核菌传播，已成为所有传染病中的重要原因。如果得不到有效控制，在未来可能有更多的人发生结核病。

新型免疫学方法中的γ-干扰素(IFN-γ)释放实验(interferon-gammareleaseassay，IGRA)是现阶段检测结核分枝杆菌感染准确性较高的方法，现有的商用试剂盒有T-SPOT.TB和QuantiFERON-TBGoldIn-Tube(QFT-IT)，这两个试剂盒的敏感性和特异性分别为80-90％之间，尚有待改进。

环介导等温基因扩增(LAMP)是新型的基因扩增法，具有以下特点：简便、快速、不需要昂贵的仪器设备，适合现场使用，不需要对模板进行热变性过程，退火和延伸在同一温度(等温)条件下进行，大大减少了反应时间，能在短时间内获得结果。LAMP的灵敏度高，能从极低微量的拷贝中扩增出目的基因，扩增效率高达10⁹-10¹⁰拷贝，比传统PCR技术高出2-3个数量级，具有与Real-Time TaqManPCR同样的敏感性。

然而，目前的大多数结核分枝杆菌的检测样品针对的是痰标本，痰标本取样多为病人自取，人为误差容易造成标本感染，影响检测的准确率。又因为结核病感染初期，血液中的结核分枝杆菌难以被精确的检测出，容易造成诊断不及时，影响结核病患者的诊断和有效治疗。所以，有必要开发一种依赖于LAMP技术、准确、快速检测结核分枝杆菌的新型试剂盒。

发明内容

本发明提供的一种用于结核分枝杆菌感染检测的试剂盒及检测方法，该试剂盒能够高效、快速、准确、灵敏的得到血液中结核分枝杆菌感染的检测结果，且检测结果特异性高、敏感性强。

本发明的目的是提供一种用于结核分枝杆菌感染检测的试剂盒，包括如下部分：

由检测引物、10倍环介导等温扩增反应液、DNA聚合酶、阳性对照、阴性对照、显色剂和菌体扩培液组成；所述的检测引物是由一对外引物F3/B3和一对内引物FIP/BIP组成，

外引物F3的序列为：5’-CTGGGCCTCAAGCAAGG-3’

外引物B3的序列为：5’-CGACGTCGCTGACCACTT-3’

内引物FIP的序列为：

5’-CGGGCGACGGTTTCGAAGTCGGAAGACGGGGTCAACGGT-3’

内引物BIP的序列为：

5’-CGGCTGCAAGAGATGGCGTCTTGGGTCACCCTCTCGT-3’

其中，所述的一对外引物F3/B3与一对内引物FIP/BIP的摩尔数之比为1：6；所述的DNA聚合酶为BstDNA聚合酶，活力为8U/微升；所述的阴性对照为灭菌双蒸水；

每升所述菌体扩培液由以下组分制成：5-10g的葡萄糖、5-10g的鸡蛋清、6.7μmol的EDTA、100mL的甘油、30mmoL的二硫苏糖醇、8-12g的PEG-4000，余量为双蒸水；