[发明专利]去细胞皮瓣及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及临床医学、生物医学与再生医学技术领域，尤其是涉及一种去细胞皮瓣及其制备方法和应用。

背景技术

烧伤、外伤、手术、慢性溃疡等导致皮肤缺损，而大面积的缺损机体无法自行修复其外观及功能。缺损创面需要利用皮肤移植物进行覆盖，目前临床常用的是自体皮瓣移植。取患者身体其他区域健康的皮肤(供区)，对缺损创面(受区)进行修补。这种方式能有效的覆盖皮肤缺损创面，但常常造成供区受损。随着组织工程的发展，大量人工皮肤替代物涌现。现有的皮肤替代物主要分4类：

一种是去细胞真皮：通过去细胞方法去除细胞成分，保留完整的细胞外基质的异体、异种真皮。但是，此种方法具有如下缺点，如异体皮来源有限；有传染疾病的危险且受到伦理学的制约；其中异种去细胞真皮修补创面后创面挛缩明显，创面愈合质量差；结构单薄，无法修复全厚皮肤的缺损；力学性能难于复合操作的要求等。

一种是人工合成真皮：由各种生物、化学材料构建的真皮类似物。但是，此种方法具有如下缺点，如水分易丢失；移植后还要再进行二次表皮移植；结构单薄，无法修复全厚皮肤的缺损等。

另一种是复合皮替代物：自体刃厚表皮或自体角质形成细胞膜片与真皮替代物在体内体外组合的接近正常皮肤结构的一种皮肤替代物。但是，此种方法具有如下缺点，如Apligraft因含有异体人表皮细胞，存在一定程度的免疫排斥反应；现阶段的研究停留在免疫缺陷的裸鼠模型中；缺少皮下组织的结构，无法修复深层皮肤缺损等。

还有一种是去细胞皮瓣：去细胞皮瓣的研究始于2010年，其主要制备方法是血管灌注法。目前现有的去细胞皮瓣的制备方法大致分为以下三种，第1种方法最先报道，具体方法不详，其制备过程中涉及叠氮钠有毒；第2种方法于2015年报道，以灌注法为主，同时辅以振荡法，耗时比较长；第3种方法于2016年报道，灌注NaCl、胰酶、Triton X－100、超纯水等，步骤繁琐，耗时较长。

因此，开发一种能够实现全厚皮肤及皮下组织缺损的修复，无免疫排斥反应，不涉及剧毒有害化学物质，操作步骤简单，灌注耗时短，且具有良好的细胞相容性及组织相容性的去细胞皮瓣尤为重要。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种去细胞皮瓣的制备方法，以缓解现有技术中存在的操作步骤繁琐，耗时长的技术问题。

本发明的第二个目的在于提供一种去细胞皮瓣，以缓解现有技术中存在的包含有毒害化学物质，使受体产生免疫排斥反应，且细胞相容性及组织相容性较差的技术问题。

本发明的第三个目的在于提供一种去细胞皮瓣在修补缺损创面及科学研究中的应用，以缓解现有技术中不能实现全厚皮肤及皮下组织缺损的修复的技术问题。

本发明提供的去细胞皮瓣的制备方法，包括如下步骤：

取动脉的穿支皮瓣，依次灌注肝素溶液，Triton X－100溶液和SDS溶液；将灌注后的所述穿支皮瓣进行干燥处理、灭菌处理和无菌保存。

进一步地，所述动脉为腹壁浅动脉。

进一步地，所述灌注的速度为20－40mL/h。

进一步地，所述肝素溶液为肝素PBS溶液，所述肝素PBS溶液的浓度为10－20U/mL，所述Triton X－100溶液的浓度为0.3％－2％W/V，所述SDS溶液的浓度为0.1％－1％W/V。

进一步地，所述肝素PBS溶液的灌注时间为4－8h，所述Triton X－100溶液的灌注时间为10－14h，所述SDS溶液的灌注时间为10－14h。

进一步地，所述干燥处理为将灌注后的所述穿支皮瓣置于真空冷冻干燥机内，所述干燥处理的时间为4－8h。

进一步地，所述灭菌处理为将干燥后的所述穿支皮瓣照射60Co－γ射线进行灭菌，所述60Co－γ射线的照射剂量为20－30KGy，所述灭菌处理的时间为1－3h。

进一步地，所述无菌保存的温度为－80℃。

本发明还提供了一种去细胞皮瓣，应用上述的制备方法制备得到。

另外，本发明还提供了上述的去细胞皮瓣在修补缺损创面及科学研究中的应用。

本发明提供的去细胞皮瓣的制备方法，操作步骤简单，制备耗时短；本发明提供的去细胞皮瓣，无免疫排斥反应，不涉及剧毒有害化学物质，且具有良好的细胞相容性及组织相容性；本发明提供的去细胞皮瓣在修补缺损创面及科学研究中的应用，能够实现全厚皮肤及皮下组织缺损的修复，愈合质量好。

附图说明

图1为本发明提供的去细胞皮瓣的外观图；