[发明专利]一种菌落总数快速检测卡片及使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及技术领域为食品卫生安全，具体涉及一种菌落总数快速检测卡片及使用方法。

背景技术

食品是人类赖以生存和发展的物质基础，而食品安全关系到人们的健康和国计民生，已经越来越受重视，其中菌落总数是食品卫生检验中最基本、最常见的微生物指标检测项目。

国际微生物规格委员会将菌落总数定义为在被检样品的单位重量(g)、容积(mL)或表面积(cm²)内，所含能于某种固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的菌落的总数。菌落总数是判定食品被细菌污染程度的重要标志，能反映食品加工及储藏过程是否符合食品卫生要求。

目前，食品菌落总数的检测一般是按照GB/T4789.2-20l0《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》标准进行规定的倾注平板计数法进行，其准确性、灵敏性均较高，但涉及的实验较多、操作繁琐、耗时长、准备和收尾工作繁重，而且要有大量人员参与。因此，检测食品中菌落总数操作便捷、灵敏度高、计数准确的方法具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种菌落总数快速检测卡片及使用方法，补充技术效果。

本本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种菌落总数快速检测卡片，包含自下而上依次设置的第一透明树脂层、第一透明双面胶层、第一凝胶层、通气层、第二凝胶层、第二透明双面胶层、第二透明树脂层，所述通气层上还设有通孔，用于放置样品溶液，所述第一凝胶层中均匀混合有培养基。所述第一透明树脂层、第一透明双面胶层、第一凝胶层、通气层结合为下层，第二凝胶层、第二透明双面胶层、第二透明树脂层结合为上层。上下层活页连接。

进一步地，所述第一透明树脂层、第二透明树脂层分别为PET透明塑料片。

进一步地，所述通气层为吹塑纸通气层。

进一步地，所述第二凝胶层为冷水可溶性凝胶干粉层。

进一步地，所述第一凝胶层为冷水可溶性凝胶及培养基干粉层，包含有糖类、蛋白质、显色剂、钠盐、钾盐、磷酸盐、酵母提取物、粘胶质、增稠剂的质量比例为125：150：75：4：16：20：60：50，第二凝胶层为冷水可溶性凝胶层，包含有粘胶质、增稠剂的质量比例为6：5。

进一步地，所述通气层的厚度为0.4-0.6mm。

一种菌落总数快速检测卡片的使用方法，包括以下步骤：

1)检测卡制备：冷水可溶性凝胶及培养基干粉层、冷水可溶性凝胶干粉层在粘附镂空区域约0.10～0.15g，灭菌；

2)样品制备：将样品加入无菌容器，加入无菌稀释液，混合均匀，如样液的pH非中性，则需调节样液pH至6.6～7.2；

3)接种与培养：将800μL样液垂直滴加在测试片下层的通孔中，盖上上层，至少静置1min，在培养温度为35-37℃下培养24-48h；

4)判读计数：对检测卡片上的红色菌落进行计数判读。

进一步地，所述菌落计数的面积20cm²，计数所有红色菌落，若菌落数大于300个时，可计数1-5个具有代表性的方格(方格)，换算为单个方格菌落数，经换算得到样品中菌落总数。

进一步地，所述调节样液pH使用1mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸调节。

本发明中菌落总数快速检测卡片的使用方法通过如下步骤实现菌落数量检测：通过溶性黏胶及培养基干粉层提供营养成分、水分、粘胶剂以及显色剂，镂空吹塑纸的通孔中放置样品，在35-37℃的培养箱中，培养24-48h，计数所有红色菌落(目视，或用标准菌落计数器、放大镜)，倍数换算得到菌落总数；当红色菌落数大于300个时，可计数1-5个具有代表性的方格9内的红色菌落数，换算成单个方格内的菌落数，再乘以20即为测试片上估算的细菌数。

检测卡制备：将冷水可溶性凝胶及培养基干粉层(其配方组成为每10g含有：乳糖2.50g、酵母提取物3.00g、蛋白胨粉1.50g、四氮红唑(TTC)0.08g、氯化钠0.32g、磷酸二氢钾0.40g、卡拉胶1.20g、羧甲基纤维素(CMC)1.00g)、冷水可溶性凝胶干粉层(其配方组成为每2.2g含有：卡拉胶1.20g、羧甲基纤维素(CMC)1.00g)粉碎过筛(100目)，在通孔8区域粘附约0.10～0.15g混合均匀的干粉，灭菌，无菌包装保存。

样品制备：将样品加入无菌容器，加入无菌稀释液，混合均匀，调节样液pH至6.6～7.2。