[发明专利]一种针对兴安天门冬的组培快繁方法

权利要求书

1.一种针对兴安天门冬的组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：

1)取兴安天门冬嫩茎作为外植体，清洗消毒，切成每个带有1～2个腋芽的茎段；

2)腋芽诱导培养；用于腋芽诱导培养的腋芽诱导培养基，其成分为：MS培养基，L-谷氨酰胺0.2g/L，6-BA0.2mg/L，激动素0.2mg/L，萘乙酸0.2mg/L，嘧啶醇0.1mg/L，3％蔗糖，琼脂0.8％；所述腋芽诱导培养基的pH为5.8；

3)根丛诱导培养：取步骤2)培养后的茎段，取其上长出的、超过5cm的茎，切去茎尖，平铺接种于根丛诱导培养基S2上，无菌培养20～30天，而后切除此期间长出的新生茎的茎尖，重新平铺接种于新的根丛诱导培养基S2上，继代培养1～2周期，直至每个叶腋处长出3～8个成簇的嫩茎，得到母体茎段，每个成簇的嫩茎群基部是后续诱导生根部位，即为根丛；

4)根丛增殖培养：取步骤3)所得的母体茎段，分割出若干株高为2～3cm的根丛，接种到根丛增殖培养基SA上，无菌培养20～30天，取出根丛，分割成2～4个小根丛，接种于新的根丛增殖培养基SA上，继代培养1～2周期；

5)生根预分化培养：取步骤4)培养后的小根丛，修剪至株高2～3cm，接种至生根预分化培养基RM5-1中，无菌培养20～30天，而后继代培养1～2周期；

6)生根培养：取步骤5)预分化培养后的小根丛，分割成若干株高为2～3cm的、每个带3～5个茎的子根丛，接种于生根培养基RM5-2中，无菌培养20～30天，继代培养1～2周期，直至60％以上子根丛基部长出3～5条肉质根；

其中，所述根丛诱导培养基S2的成分为：MS培养基，L-谷氨酰胺0.2g/L，6-BA 0.1mg/L，激动素0.2mg/L，萘乙酸0.2mg/L，嘧啶醇0.1mg/L，蔗糖3％，琼脂0.8％；所述根丛诱导培养基S2的pH为5.8；

所述根丛增殖培养基SA的成分为：MS培养基，L-谷氨酰胺0.2g/L，激动素0.2mg/L，萘乙酸0.2mg/L，嘧啶醇0.2mg/L，蔗糖3％，琼脂0.8％；所述根丛增殖培养基SA的pH为5.8；

所述生根预分化培养基RM5-1的成分为：MS培养基，L-谷氨酰胺0.2g/L，萘乙酸0.2mg/L，嘧啶醇1mg/L，蔗糖3％，琼脂0.8％；所述生根预分化培养基RM5-1的pH为5.8；

所述生根培养基RM5-2的成分为：MS培养基，L-谷氨酰胺0.2g/L，萘乙酸0.2mg/L，嘧啶醇1.3mg/L，蔗糖6％，琼脂0.8％；所述生根培养基RM5-2的pH为5.8。

2.根据权利要求1所述的一种针对兴安天门冬的组培快繁方法，其特征在于步骤1)具体包括以下操作：取长度为10～20cm的兴安天门冬嫩茎作为外植体，流动水冲洗10min后，在无菌条件下切成3～4段，置于60～90％v/v浓度的酒精溶液中浸泡20～40秒，然后在有效氯为0.1～0.3％的次氯酸钠溶液中浸泡6～10分钟，无菌水冲洗3～4次，无菌滤纸吸干。

3.根据权利要求1所述的一种针对兴安天门冬的组培快繁方法，其特征在于步骤5)继代培养后部分根丛基部分化诱导长出1～2条肉质根。

4.根据权利要求1所述的一种针对兴安天门冬的组培快繁方法，其特征在于步骤6)所得产物每株上具有4～6根嫩茎和3～4条肉质贮藏根，所述贮藏根的根长为3～4cm。

5.根据权利要求4所述的一种针对兴安天门冬的组培快繁方法，其特征在于还包括以下步骤7)：在春季4～5月份或秋季9～10月份择时将步骤6)培养得到的组培苗开瓶，炼苗5～7天，洗净根部，修剪茎顶，移栽至大棚内泥炭土基质中，用遮光率为50～75％的遮阳网覆盖大棚进行遮光保湿处理7～10天，随后常规育苗管理20～30天，获得移栽成活的兴安天门冬幼苗植株。

6.根据权利要求1～4任一项所述的一种针对兴安天门冬的组培快繁方法，其特征在于所述无菌培养的条件均为：温度26～28℃，相对湿度70～80％，光照时间为12h/d，光照强度2500Lux。