[发明专利]同时检测五种草莓病毒的串联抗原表位肽及其鸡卵黄抗体的制备方法

说明书

本发明公开了同时检测五种草莓病毒的串联抗原表位肽，所述抗原表位肽的氨基酸序列为SEQ ID No.1；所述五种草莓病毒分别为草莓轻型黄边病毒SMYEV、草莓斑驳病毒SMV、草莓皱缩病毒SCV、草莓潜隐环斑病毒SLRSV和草莓镶脉病毒SVBV；还提供了其核苷酸、重组载体及重组宿主细胞。本发明的有益效果为：本发明提供的同时检测五种草莓病毒的串联抗原表位肽、核苷酸、重组载体、重组宿主细胞及串联抗原表位肽鸡卵黄抗体的制备方法，串联表位肽具有免疫原性，将抗原表位肽免疫京红一号产蛋鸡产生的卵黄免疫球蛋白(IgY)可以同时检测五种草莓病毒，大大降低了成本，而且速度快、特异性强、灵敏度高，为草莓种植业的稳定发展提供了技术保障。

技术领域

本发明涉及分子检测技术领域，具体涉及同时检测五种草莓病毒的串联抗原表位肽、核苷酸、重组载体、重组宿主细胞，及串联抗原表位肽鸡卵黄抗体的制备方法。

背景技术

草莓(Fragaria ananassa Duchesne)是蔷薇科(Rosaceae)草莓属(Fragaria)多年生草本植物，是一种高营养、高经济价值的全球性分布红色小浆果。据报道，1985年我国草莓种植面积仅仅3300 公顷，占当年世界总草莓种植面积的1.67%；而到2002年我国草莓种植面积达到36700公顷居全球第一，年总产量35.7万吨居全球第二；至2003 年我国草莓种植面积达到66700公顷，产量突破80万吨，种植面积与总产量均居世界首位，成为世界第一草莓生产大国。随着栽培面积的不断扩大，草莓病毒对其生产危害也日益严重。世界草莓种植区出现的病毒病、类病毒病和菌原体病害等有25种之多，其中分布广泛、为害严重的有6-7种。在我国草莓种植区，对生产造成严重损失的病毒主要有草莓轻型黄边病毒(strawberry mild yellow edge virus, SMYEV)、草莓斑驳病毒(strawberry mottlevirus, SMV)、草莓皱缩病毒(strawberry crinkle virus, SCV)、草莓潜隐环斑病毒(strawberry latent ring-spot virus, SLRSV) 和草莓镶脉病毒(strawberry veinbanding virus, SVBV)等五种病毒。在生产上，草莓带病毒株率平均为80.2%，单种病毒侵染株率为41.6%，2种以上病毒复合侵染株率为38.6%。病毒对草莓危害严重，一种病毒单独侵染可减产30%，复合侵染可减产80%左右。草莓病毒病是影响草莓农业生产的关键问题，长期制约着草莓的产量和品质。解决草莓病毒病的主要手段是培育和推广使用无毒苗，而病毒检测方法是无毒苗培育中的一个重要环节。检测草莓病毒感染状况对培育草莓无毒苗和草莓田间种植意义重大。

目前，一次检测一种草莓病毒的方法已有较多报道。但是，一次（联合）检测多种草莓病毒的方法国内外均未见报道。除草莓镶脉病毒外，大多数草莓病毒为RNA病毒，已报道的研究方法多是以RT-PCR方法进行检测。RT-PCR对操作人员的熟练程度要求较高，实践过程之常因RNA降解造成假阴性，因此，在草莓育种行业普及应用有较大难度。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了同时检测五种草莓病毒的串联抗原表位肽、核苷酸、重组载体、重组宿主细胞，及串联抗原表位肽鸡卵黄抗体的制备方法。本发明的5S抗原表位肽免疫京红一号产蛋鸡产生的卵黄免疫球蛋白(IgY)可以同时检测五种草莓病毒，大大降低了成本，而且速度快、特异性强、灵敏度高。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：同时检测五种草莓病毒的串联抗原表位肽，所述抗原表位肽的氨基酸序列为SEQ ID No.1；所述五种草莓病毒分别为草莓轻型黄边病毒SMYEV、草莓斑驳病毒SMV、草莓皱缩病毒SCV、草莓潜隐环斑病毒SLRSV和草莓镶脉病毒SVBV。

本发明的第二个目的是提供了一种编码同时检测五种草莓病毒的串联抗原表位肽的核苷酸序列，所述核苷酸序列为编码上述的同时检测五种草莓病毒的串联抗原表位肽的核苷酸序列。

进一步的，上述的一种编码同时检测五种草莓病毒的串联抗原表位肽的核苷酸序列，所述核苷酸序列为SEQ ID No.2。