[发明专利]一种抗Her2的纳米抗体

说明书

技术领域

本发明属于生物医学或生物制药技术领域，涉及一种针对于Her2的纳米抗体。

背景技术

人表皮生长因子受体-2(Her2)是迄今为止乳腺癌中研究较为透彻的基因之一，于20世纪80年代分别由三个研究小组独立发现。Her2基因的过表达不仅与肿瘤的发生发展相关外，还是一个重要的临床治疗监测及预后指标，并且是肿瘤靶向治疗药物选择的一个重要靶点。血清Her2与组织学Her2、乳腺癌患者的肿瘤负荷、淋巴结状况均有一定关联，并可能对化疗或内分泌治疗疗效产生一定影响，可能是一个独立的预后因素。

人类表皮生长因子受体(human epidermal growth factor receptor)家族有4个成员：EGFR、Her2(人类表皮生长因子受体2)、ErbB3和ErbB4，广泛表达于上皮、间质及神经组织，生理状态下它们参与激活一系列复杂的细胞信号转导途径，调控正常组织细胞的生长、分裂、分化等重要生理过程。然而研究表明某些肿瘤的发生、发展及恶性生物学行为与EGFR家族的异常表达和活化关系密切(Albanell J,CodonyJ,Rovira A,Mellado B,Gascón P.Mechanism of action of anti-Her2monoclonal antibodies:scientific update on trastuzumab and2C4.Adv Exp Med Biol.2003；532:253-68)。Her2没有天然配体，在单体状态下无活性，当形成二聚体时可使酪氨酸激酶活化，激活MAPK和PI3K/Akt通路，最终导致肿瘤细胞增殖和存活(Hudis CA.Trastuzumab-mechanism of action and use in clinical practice.N Engl J Med.2007Jul5；357(1):39-51)。

1993年比利时科学家首次在Nature报道：在骆驼血液中的抗体，有一半没有轻链，而且更让人惊喜的是，这些缺失轻链的“重链抗体”能像正常抗体一样与抗原等靶标紧密结合，另外不像scFv(人工改造的单链抗体片段)那样互相粘连，甚至聚集成块。这种抗体只包含一个重链可变区和两个常规的CH2与CH3区，更重要的是单独克隆并表达出来的VHH区(重链可变区)具有很好的结构稳定性与抗原结合活性，分子量只是普通抗体的1/10，所以VHH也称Nanobody(纳米抗体)；与此同时纳米抗体化学性质也更加灵活，稳定性好，可溶性高，表达容易且容易获得，容易偶联其他分子，因此应用纳米抗体技术研发Her2检测试剂具有广阔的前景。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供一种针对Her2表位的纳米抗体，同时提供该纳米抗体的编码的氨基酸序列以及核苷酸序列。

技术方案：为实现上述目的，本发明的第一方面，提供了一种Her2的纳米抗体的VHH链，选自下组的FR的氨基酸序列：SEQ ID NO：1所示的VHH1，SEQ ID NO：2所示的VHH2，SEQ ID NO：3所示的VHH3，SEQ ID NO：4所示的VHH4；或SEQ ID NO：5所示的VHH5，SEQ ID NO：6所示的VHH6，SEQ ID NO：7所示的VHH7。

本发明第2方面，提供了一种DNA分子，它编码选自下组的蛋白质：本发明所述的Her2的纳米抗体的VHH链，或本发明所述的Her2纳米抗体。优选地，所述的DNA分子，其特征在于，它具有选自下组的DNA序列：SEQ ID NO：8至SEQ ID NO：14

本发明的第3方面，提供了一种表达载体，它含SEQ ID NO：8至SEQ ID NO：14所示的核苷酸序列。

本发明的第4方面，提供了本发明所述的Her2纳米抗体用于检测Her2的用途。

有益效果：与现有技术相比，本发明的优点如下：本发明将Her2抗原免疫羊驼，随后利用该骆驼外周血淋巴细胞进行流式细胞筛选，得到阳性结果之后提取RNA，进行反转录获得cDNA。从而获得了针对Her2特异性的纳米抗体基因，将此基因转至大肠杆菌中，从而建立了能在大肠杆菌中高效表达的纳米抗体株。

附图说明

图1是纳米抗体的基因电泳图；其中泳道1是DL2000DNA分子标准，DL2000(2000bp,1000bp,750bp,500bp,250bp,100bp)泳道2-8是PCR扩增重链抗体可变区片段