[发明专利]一种基于RGD多肽修饰的超支化聚乙烯亚胺纳米探针的制备方法

权利要求书

1.一种基于RGD多肽修饰的超支化聚乙烯亚胺纳米探针的制备方法，包括：

(1)在一端氨基、另一端羧基的聚乙二醇NH₂-PEG-COOH溶液中加入6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯溶液中反应8-12h，再把RGD多肽溶液逐滴加入已活化的NH₂-PEG-COOH中，搅拌反应2-4d，透析，冷冻干燥，即得RGD-PEG-COOH；

(2)在PEI溶液中逐滴加入二乙烯五乙酸盐DTPA溶液，搅拌反应20-30h透析，冷冻干燥，即得PEI-DTPA；

(3)在羧基化聚乙二醇单甲醚mPEG-COOH溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC·HCl溶液，室温搅拌15-30min，然后加入N-羟基丁二酰亚胺NHS溶液继续搅拌2-3h，得到混合溶液；随后将混合溶液逐滴加入PEI-DTPA溶液中，搅拌反应2-4d，透析，冷冻干燥，即得PEI-DTPA-mPEG；

(4)在RGD-PEG-COOH溶液中加入EDC·HCl溶液，室温搅拌15-30min，然后加入NHS溶液继续搅拌2-3h，得到混合溶液；将混合溶液逐滴加入PEI-DTPA-mPEG溶液中，搅拌反应2-4d，溶液，透析，冷冻干燥，得到RGD靶向的功能化聚乙烯亚胺分子，标记为PEI-DTPA-mPEG-(PEG-RGD)；

(5)在PEI-DTPA-mPEG-(PEG-RGD)水溶液中加入HAuCl₄溶液搅拌15-30min，再加入NaBH₄溶液，继续搅拌2-4h；然后加入三乙胺N(C₂H₅)₃搅拌20-40min，再加入乙酸酐Ac₂O搅拌反应20-30h，透析，冷冻干燥，即得RGD多肽修饰的金纳米颗粒，标记为RGD-Au PENPs；(6)将RGD-Au PENPs溶液中加入SnCl₂溶液搅拌5-10min，然后再加入无菌放射性高鍀酸盐溶液并混合反应5-10min，纯化分离，得到螯合核素^99mTc的金纳米颗粒，标记为RGD-^99mTc@Au PENPs，即为RGD多肽修饰的超支化聚乙烯亚胺纳米探针。

2.根据权利要求1所述的一种基于RGD多肽修饰的超支化聚乙烯亚胺纳米探针的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的RGD与NH₂-PEG-COOH的摩尔比为1:1；6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯与NH₂-PEG-COOH的摩尔比为1:1；RGD的分子量为706.67g/mol，浓度为4-6mg/mL，6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯的浓度为6-10mg/mL，NH₂-PEG-COOH的分子量为2000g/mol，浓度为3-5mg/mL。

3.根据权利要求1所述的一种基于RGD多肽修饰的超支化聚乙烯亚胺纳米探针的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的DTPA与PEI的摩尔比为10:1；DTPA的分子量为357.32g/mol，DTPA溶液的浓度为20-30mg/mL，PEI的浓度为3-5mg/mL。

4.根据权利要求1所述的一种基于RGD多肽修饰的超支化聚乙烯亚胺纳米探针的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中的EDC·HCl与mPEG-COOH的摩尔比为10:1，NHS与mPEG–COOH的摩尔比为10:1，mPEG-COOH与PEI-DTPA的摩尔比为20:1；mPEG-COOH的分子量为2000g/mol，mPEG-COOH溶液的浓度为3-5mg/mL，EDC溶液的浓度为5-8mg/mL，NHS溶液的浓度为3-6mg/mL，PEI-DTPA溶液的浓度为2-4mg/mL。

5.根据权利要求1所述的一种基于RGD多肽修饰的超支化聚乙烯亚胺纳米探针的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中的EDC·HCl与RGD-PEG-COOH的摩尔比为10:1，NHS与RGD-PEG-COOH的摩尔比为10:1，RGD-PEG-COOH与PEI-DTPA-mPEG的摩尔比为10:1；RGD-PEG-COOH溶液的浓度为3-5mg/mL，EDC溶液的浓度为5-8mg/mL，NHS溶液的浓度为3-6mg/mL，PEI-DTPA-mPEG溶液的浓度为2-4mg/mL。