[发明专利]一种浮游植物细胞内外活性氧的检测方法

权利要求书

1.一种浮游植物细胞内外活性氧的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）取近海典型浮游植物于f/2培养基中进行培养，该f/2培养基中含有用以标记近海典型浮游植物的SA-CDs，获得SA-CDs标记培养液，具体培养条件如下：f/2培养基中含有14~16 mg/L CDs，置于光照强度为130~150μmol photons （m² s）^-1，光暗比为12~15 h:8~10 h，温度为18~20℃ 生化培养箱中培养，以80~120 rpm搅拌海藻悬浮液模拟海水流动，同时减少CDs在容器壁上吸附；上述SA-CDs为水杨酸表面修饰的碳量子点；

（2）以H₂O₂溶液作为活性氧标准液，根据上述SA-CDs在不同浓度的活性氧标准液的荧光强度变化的情况，获得第一线性工作曲线：y=0.2599x+2.404，其线性范围 6-150 ng/L，其中x表示H₂O₂浓度，y表示荧光强度；根据上述SA-CDs在不同浓度的活性氧标准液的显色吸光度变化情况，获得第二线性工作曲线：y=-0.0002x+0.1941，其线性范围为3-400ng/L ，其中x表示H₂O₂浓度，y表示吸光强度；

（3）步骤（1）获得的SA-CDs标记培养液中的藻细胞悬浮于适量海水中，于17~19℃同时在高压汞灯持续照射下，以80~100rpm的速度持续搅拌0.8~1.2h，然后取适量进行超声波破碎，得破碎液，在破碎液中加入适量FeCl₃溶液后于激发波长343 nm，发射波长440 nm下扫描其荧光光谱Slit 2.5/5，记录试剂空白和试液的荧光强度F₀和F₁，计算荧光强度变化值△F= F₀-F₁，最后将该荧光强度变化值△F作为y代入步骤（2）所得的第一线性工作曲线，所得x即为藻细胞内活性氧浓度检测结果；

（4）步骤（1）获得的SA-CDs标记培养液中的藻细胞悬浮于适量海水中，于17~19℃同时在高压汞灯持续照射下，以80~100rpm的速度持续搅拌0.8~1.2h，得细胞悬浮液，在该细胞悬浮液中加入适量FeCl₃溶液后于波长λ525nm检测吸光强度，最后将该吸光强度作为y代入步骤（2）所得的第二线性工作曲线，所得x即为藻细胞外活性氧浓度检测结果。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述近海典型浮游植物包括威氏海链藻CCMA-102和小球藻CCMA-410。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述SA-CDs的制备方法如下：取1.0 mLCDs储备液于100 mL 容量瓶中，再称取0.0138 g水杨酸加入其中溶解后定容至刻度线，避光搅拌24 h后置暗处2~8℃保存备用。

4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于：所述CDs储备液的中CDs的粒径为2-5nm，浓度为3 g/L，量子产率≥60%，表面基团含氨基、羟基和羰基，其激发波长为343 nm，发射波长为440 nm。

5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述f/2培养基由浓度为75.0 g/L硝酸钠母液、浓度为5.0 g/L的磷酸钠母液、浓度为30.0 g/L的硅酸钠母液、微量元素母液、维生素母液和海水组成，且硝酸钠母液、磷酸钠母液、硅酸钠母液、微量元素母液、维生素母液和海水的体积比为2：2：2：2：1：2000，其中微量元素母液中含有氯化铁3.15 g/L、硫酸铜9.8g/L、钼酸钠6.3 g/L、硫酸锌22.0 g/L、氯化钴10.0 g/L、氯化锰180.0 g/L，维生素母液含有维生素B12 1.0 g/L、生物素0.1 g/L和盐酸硫胺0.2g/L。

6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述FeCl₃溶液的浓度为10 mmol /L。