[发明专利]一种人类精子线粒体功能检测方法

权利要求书

1.一种人类精子线粒体功能检测方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将液化的精液用37℃缓冲液稀释精子至1～2×10⁶个/mL，每个标本处理两管，分别作为对照管和检测管，其中所述的缓冲液为氯化钠、磷酸二氢钾、葡萄糖、氯化钾、酸镁、氯化钙、N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸二钠盐、碳酸氢钠、丙酮酸钠、牛血清白蛋白和乳酸钠的混合物；

(2)将500μL稀释过的精子加入到流式细胞仪上样管中，同时加入5μL的JC-1染色液，避光染色15分钟，其中对照管置于85℃条件下2分钟，灭活，检测管置于37℃条件下保持活力，所述的JC-1染色液为JC-1和二甲基亚砜的混合物；

(3)设定流式细胞仪的校准，对照管、检测管按顺序上机，每管样本至少连续测定两次，每管样本至少记录样本主群5000个细胞并使用MMP软件统计分析；

(4)根据MMP软件统计分析得出结果，将37℃正常处理样本百分比减去85℃高温处理后的空白样本百分比，得到的MMP百分比差值即区分出正常人群百分比数值；

(5)测定后，分别用漂白剂、进样管清洁剂和除菌的双蒸水彻底清除残留于流式细胞仪进样线中的细胞碎片和荧光染料。