[发明专利]靶向抑制整合素β1表达的小发夹RNA重组载体及其构建方法在审
| 申请号： | 201710127986.2 | 申请日： | 2017-03-06 |
| 公开（公告）号： | CN106947778A | 公开（公告）日： | 2017-07-14 |
| 发明（设计）人： | 邱晨;李杰;王凌伟;何旗 | 申请（专利权）人： | 深圳市人民医院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66 |
| 代理公司： | 深圳市道臻知识产权代理有限公司44360 | 代理人： | 陈琳 |
| 地址： | 518020 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 靶向 抑制 整合 表达 发夹 rna 重组 载体 及其 构建 方法 | ||
1.靶向抑制整合素β1表达的小发夹RNA重组载体，其特征在于：包括RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen1载体的基本序列、抗性基因序列、多克隆位点序列、启动子序列和靶向整合素β1基因的寡核苷酸链；所述多克隆位点包括BamH I酶切位点和EcoR I酶切位点，所述寡核苷酸链由BamH I酶切位点+靶序列正义链+茎环结构+靶序列反义链+EcoR I酶切位点组成，所述寡核苷酸链正向插入所述多克隆位点中。
2.根据权利要求1所述的靶向抑制整合素β1表达的小发夹RNA重组载体，其特征在于：所述寡核苷酸链的正义链为：GATCCGGCAGGGCCAAATTGTGGGTTTCAAGAGAACCCACAATTGGCCCTGCACGCGTG，即SEQ ID NO：1；所述寡核苷酸链的反义链为：AATTCACGCGTGCAGGGCCAAATTGTGGGTTCTCTTGAAACCCACAATTTGGCCCTGCCG，即SEQ ID NO：2。
3.根据权利要求1所述的靶向抑制整合素β1表达的小发夹RNA重组载体，其特征在于：所述抗性基因序列包括氨苄青霉素抗性基因。
4.根据权利要求1所述的靶向抑制整合素β1表达的小发夹RNA重组载体，其特征在于：所述RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen1载体购自美国Clontech公司。
5.根据权利要求1所述的靶向抑制整合素β1表达的小发夹RNA重组载体的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1寡核苷酸链的设计：根据整合素β1mRNA基因序列，经同源性比对证实特异性后，应用小发夹RNA设计软件选取整合素β1mRNA靶序列，设计并合成靶向整合素β1基因的寡核苷酸链；
S2小发夹RNA重组载体的构建：将RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen1载体进行BamHI和EcoRI酶切，将合成的靶向整合素β1基因的寡核苷酸链正向插入酶切后的RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen1载体多克隆位点中，将连接产物转化感受态细胞，过夜后挑取阳性克隆，在培养液中扩增、提取质粒，得到靶向抑制整合素β1表达的小发夹RNA重组载体。
6.根据权利要求5所述的靶向抑制整合素β1表达的小发夹RNA重组载体的构建方法，其特征在于：所述寡核苷酸链的正义链为：GATCCGGCAGGGCCAAATTGTGGGTTTCAAGAGAACCCACAATTGGCCCTGCACGCGTG，即SEQ ID NO：1；所述寡核苷酸链的反义链为：AATTCACGCGTGCAGGGCCAAATTGTGGGTTCTCTTGAAACCCACAATTTGGCCCTGCCG，即SEQ ID NO：2。
7.根据权利要求5所述的靶向抑制整合素β1表达的小发夹RNA重组载体的构建方法，其特征在于：所述感受态细胞为DH-5а感受态细胞。
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