[发明专利]一种快速鉴定乳酸菌产生氨基甲酸乙酯前体物瓜氨酸的方法

权利要求书

1.一种快速检测乳酸菌精氨酸脱亚胺酶途径的方法，其特征在于，所述方法是以乳酸菌基因组DNA为模板，分别用引物对A和引物对B进行PCR，如果能够得到分别为200～300bp、450bp～550bp的PCR产物，那么该乳酸菌具有精氨酸脱亚胺酶途径，否则该乳酸菌不具有精氨酸脱亚胺酶途径；

其中引物对A由核苷酸序列为SEQ ID NO.1和核苷酸序列为SEQ ID NO.2的核苷酸片段组成，或者是由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的序列同时进行反向互补后得到的两个核苷酸片段组成；所述引物对B由核苷酸序列为SEQ ID NO.3和核苷酸序列为SEQ ID NO.4的核苷酸片段组成，或者是由SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4的序列同时进行反向互补后得到的两个核苷酸片段组成。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乳酸菌包括乳酸乳球菌、弯曲乳杆菌、发酵乳杆菌、植物乳杆菌、乳杆菌、短乳杆菌、魏斯氏菌、德氏乳杆菌、干酪乳杆菌、棒状乳杆菌、柠檬明串珠菌、假肠膜明串珠菌、肠膜明串珠菌。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述200～300bp具体是指250bp；所述用450bp～550bp具体是指500bp。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR的反应体系为：DNA模板<500ng，上游引物和下游引物各0.2～1μM，10×Ex Taq Buffer 5μL，dNTP 4μL，灭菌蒸馏水补至50μL。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR的反应条件为：预变性，94℃，4min；变性，94℃，35s；退火，50℃，35s，延伸，72℃，40s；变性、退火、延伸进行30个循环，继续延伸，72℃，10min，最后10℃保持直到取出。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR产物的检测是使用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。

7.一种组合引物对，其特征在于，所述组合引物对包括引物对A和引物对B；其中引物对A由核苷酸序列为SEQ ID NO.1和核苷酸序列为SEQ ID NO.2的核苷酸片段组成，或者是由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的序列同时进行反向互补后得到的两个核苷酸片段组成；所述引物对B由核苷酸序列为SEQ ID NO.3和核苷酸序列为SEQ ID NO.4的核苷酸片段组成，或者是由SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4的序列同时进行反向互补后得到的两个核苷酸片段组成。

8.权利要求7所述组合引物对在食品中乳酸菌检测方面的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述食品包括发酵食品或饮料。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述食品是酱油、发酵香肠、黄酒等。