[发明专利]一种口腔中硫化氢产生菌的定量检测方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及口腔护理技术，尤其涉及口臭、口气的研究，具体涉及一种口腔中硫化氢产生菌的定量检测方法和应用。

背景技术

口气，又名口臭，是人群中常见的一种疾病，发病原因有全身的和局部的，据报道发病原因属于口腔内因素的患者占80％，其中牙周炎和龈炎患者各占50％。口腔中的细菌与唾液、菌斑中的蛋白质作用形成硫化氢等挥发性硫化物是引起口臭的主要原因。口臭气味的主要成份是挥发性硫化物，其中90％为硫化氢(H₂S)和甲硫醇。口腔中的细菌主要有：葡萄球菌、链球菌、涎链球菌、放线菌、棒状杆菌、范永球菌、乳酸杆菌、梭形杆菌、螺旋菌、奈瑟菌和伴放线杆菌等，其中数量最多、最主要的是链球菌、葡萄球菌和乳酸杆菌。

产生硫化氢的细菌主要包括牙龈卟啉单胞菌、齿垢螺旋体和中间普雷沃菌。舌苔上产硫化氢的细菌主要为韦荣球菌属、放线菌属和普雷沃菌属，口臭患者口腔中这些细菌的数量明显高于健康人群。在半胱氨酸中产生硫化氢的细菌主要有厌氧消化链球菌、微小普雷沃菌、黏液真杆菌、牙周蜈蚣菌、蛛形新月形单胞菌以及拟杆菌属，在血清中产生硫化氢的细菌有中间普雷沃菌、洛氏普雷沃菌、牙龈卟啉单胞菌和齿垢密螺旋体。

口臭会给生活带来诸多困扰，目前评价口臭的方法主要有三种:(1)人的感官评价，主要是通过闻的方式根据被测试者口气的严重程度给出评分，但该方法需要有经验的人才能给出较准确的评分，且人的感官因人而异，带有很大的主观性，数据准确性低；(2)细菌分析法，取舌苔或舌背样品，用特异性培养基培养，鉴定某些特异菌种并菌落计数，但该方法要对不同选择培养基上的菌落进行菌种鉴定，步骤繁琐，实验周期长；(3)硫化物测定法，主要是使用便携式硫化物测定仪Halimeter或者气相色谱法测定硫化物的含量，但仪器设备资金投入较大，而且对操作人员要求高。

有关于简易口臭实验模型的研究报道提到了醋酸铅试纸法，并验证了醋酸铅法与Halimeter法的相关性，实验证明醋酸铅试纸变色程度与Halimeter测得的硫化物含量有较好的正相关性，说明醋酸铅法在原理上说是一种比较可靠的方法，但是该报道仅仅是通过人的视觉感官对醋酸铅试纸变色程度进行评价来对口臭进行简单地判断，无法实现细菌的量化统计和分析，从而无法对口臭进行有效地治疗。

发明内容

本发明目的在于针对现有技术的不足，提供一种操作简单、数据可靠、成本低廉的，能够对口腔中产生硫化氢的细菌进行定量检测的方法。

本发明的另一个目的是提供上述定量检测方法的应用。

本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的：

一种口腔中硫化氢产生菌的定量检测方法，该检测方法包括如下步骤：

步骤1

将胰蛋白胨大豆琼脂培养基或脑心浸液琼脂培养基于115℃,高温蒸汽灭菌20分钟后，备用；

配制醋酸铅水溶液、五水合硫代硫酸钠水溶液和还原型谷胱甘肽水溶液；

步骤2

将步骤1配制的醋酸铅水溶液、五水合硫代硫酸钠水溶液和还原型谷胱甘肽水溶液分别经过滤除菌处理后加入到步骤1灭菌处理后的培养基中，混合均匀后倒平板；

步骤3

将待测样品涂布步骤2制备的平板，37℃恒温培养36～48h后，进行菌落计数。

上述步骤1中，所述胰蛋白胨大豆琼脂培养基采用市售的胰蛋白胨大豆琼脂培养基即可实现本发明，也可以按照胰蛋白胨大豆琼脂培养基的传统配方配制：每升胰蛋白胨大豆琼脂培养基含有胰蛋白胨15g、大豆蛋白胨5g、氯化钠5g和琼脂15g，pH7.3±0.2，25℃。

上述步骤1中，所述脑心浸液琼脂培养基采用市售的脑心浸液琼脂培养基即可实现本发明，也可以按照脑心浸液琼脂培养基的传统配方配制：每升脑心浸液琼脂培养基含有牛脑浸粉4g、牛心浸粉4g、蛋白胨5g、酪蛋白胨16g、氯化钠5g、葡萄糖2g、硫酸氢二钠2.5g和琼脂13.5g，pH值7.4±0.2，25℃。

上述步骤1中，醋酸铅、五水合硫代硫酸钠和还原性谷胱甘肽均为市售产品。