[发明专利]一种用于体外蛋白质合成的蛋白合成体系、试剂盒及其制备方法有效
| 申请号： | 201710125619.9 | 申请日： | 2017-03-04 |
| 公开（公告）号： | CN108535489B | 公开（公告）日： | 2019-04-19 |
| 发明（设计）人： | 郭敏;柴智;刘帅龙;符雷;王海鹏;于雪 | 申请（专利权）人： | 康码（上海）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201321 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 体外蛋白质合成 表达系统 蛋白合成 试剂盒 无细胞 体外 制备 合成 荧光素酶活性 表达体系 合成蛋白 红细胞体 光单位 兔子 网织 蛋白 | ||
1.一种体外的无细胞的蛋白合成体系，其特征在于，所述无细胞的蛋白合成体系包括：
(a)酵母细胞提取物，所述酵母细胞提取物来源于乳酸克鲁维酵母；
(b)聚乙二醇；
(c)任选的外源蔗糖；
(d)磷酸肌酸与磷酸肌酸酶，和
(e)任选的溶剂，所述溶剂为水或水性溶剂。
2.如权利要求1所述的蛋白合成体系，其特征在于，所述无细胞的蛋白合成体系还包括选自下组的一种或多种组分：
(f1)用于合成RNA的底物；
(f2)用于合成蛋白的底物；
(f3)镁离子；
(f4)钾离子；
(f5)缓冲剂；
(f6)RNA聚合酶。
3.如权利要求1所述的蛋白合成体系，其特征在于，所述无细胞的蛋白合成体系还包括(f1)人工合成的tRNA。
4.如权利要求1所述的蛋白合成体系，其特征在于，所述无细胞的蛋白合成体系还包括(g1)外源的用于指导蛋白质合成的DNA分子。
5.如权利要求1所述的蛋白合成体系，其特征在于，所述聚乙二醇选自下组：PEG3000、PEG8000、PEG6000、PEG3350或其组合。
6.如权利要求1所述的蛋白合成体系，其特征在于，所述蛋白合成体系中，组分(a)的浓度(v/v)为20％-70％，以所述蛋白合成体系的总体积计。
7.如权利要求1所述的蛋白合成体系，其特征在于，所述蛋白合成体系中，组分(a)的浓度(v/v)为30％-60％，以所述蛋白合成体系的总体积计。
8.如权利要求1所述的蛋白合成体系，其特征在于，所述蛋白合成体系中，组分(a)的浓度(v/v)为40％-50％，以所述蛋白合成体系的总体积计。
9.如权利要求1所述的蛋白合成体系，其特征在于，所述蛋白合成体系中，组分(b)的浓度(w/v)为0.5-4％。
10.如权利要求1所述的蛋白合成体系，其特征在于，所述蛋白合成体系中，组分(b)的浓度(w/v)为1-2％。
11.一种体外合成蛋白质的方法，其特征在于，包括步骤：
(i)提供权利要求1所述的体外的无细胞的蛋白合成体系，并加入外源的用于指导蛋白质合成的DNA分子；
(ii)在适合的条件下，孵育步骤(i)的蛋白合成体系一段时间T1，从而合成由所述外源DNA编码的蛋白质。
12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述的方法还包括：(iii)任选地从所述蛋白合成体系中，分离或检测所述的由外源DNA编码的蛋白质。
13.一种用于体外无细胞合成蛋白的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括标签或说明书、容器以及位于所述容器中的权利要求1-10任一项所述的蛋白合成体系中的各组分。
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