[发明专利]一种角膜基质、制备方法与应用

权利要求书

1.一种角膜基质，其特征在于：采用动物的眼角膜为原料，去除角膜上皮层、角膜基质中的细胞成分和DNA成分，保留前弹力层和部分厚度角膜基质，保留完整的细胞外基质成分；所述角膜基质通过以下步骤制备：

(1)原料处理：取动物的眼球，取角膜、清洗后浸泡于纯化水中；

(2)冻融溶胀：角膜先用水浸泡，再冷冻；冷冻后取出、待完全解冻后用纯化水冲洗，然后再浸泡；重复上述冷冻、解冻过程多次，得到吸水膨胀的角膜；

(3)病毒灭活：采用过氧乙酸-乙醇溶液浸泡角膜进行病毒灭活；

(4)清洗过程：分别用PBS溶液和纯化水在超声装置中处理角膜；其中，PBS溶液pH6-8、溶液温度为10-40℃，PBS溶液与角膜的体积比为(30-60)︰1，清洗2-4次，每次10-30min；然后采用10-40℃的注射用水清洗，注射用水与角膜体积比为(30-60)︰1，至检测电导率为10μs/cm以下终止；

(5)免疫原去除：免疫原去除液为PBS溶液，所述PBS溶液中包含胰蛋白酶和EDTA，角膜的免疫原去除过程在多频超声装置中进行；其中，免疫原去除液中胰蛋白酶质量百分比浓度为0.01-0.2％，EDTA的浓度0.1-1mmol/L，免疫原去除液的pH值为7-8；多频超声装置提供至少包括两个超声频率，低频频率范围为20-40KHz，高频频率为60-90KHz，其中低频处理5-40min，高频处理5-40min，温度范围为20-35℃；

(6)清洗过程：分别用PBS溶液和纯化水在超声装置中处理角膜；

(7)重复步骤(5)和(6)多次，然后将角膜浸泡在纯化水中；

(8)切削取材：在解剖镜下使用角膜板层刀，切取角膜前弹力层和部分基质、然后将其浸泡于纯化水中；

(9)烘干干燥：将角膜平展在支撑件表面，放置在烘箱中进行干燥获得角膜基质。

2.根据权利要求1所述的角膜基质，其特征在于：所述动物为哺乳动物。

3.根据权利要求2所述的角膜基质，其特征在于：所述哺乳动物为猪或牛。

4.根据权利要求1所述的角膜基质，其特征在于：所述的部分厚度角膜基质为与前弹力层相连的具有一定厚度的角膜基质，所述的细胞外基质包括胶原蛋白和糖胺聚糖。

5.根据权利要求4所述的角膜基质，其特征在于：

所述胶原蛋白为I型胶原蛋白和IV型胶原蛋白，所述I型胶原蛋白和IV型胶原蛋白的含量为85-90％；

所述糖胺聚糖为硫酸软骨素和硫酸角质素；

所述角膜基质为直径7-10mm，厚度0.1-0.2mm的圆片；

所述去除角膜上皮层、角膜基质中的细胞成分和DNA成分是指所述细胞残留量为0个、DNA残留量小于10ng/mg、半乳糖甘酶清除率为99％以上。