[发明专利]一种肉苁蓉分子身份证及快速鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于中药材来源品种鉴定技术领域，具体涉及用一种肉苁蓉的分子身份证及快速鉴定方法。

背景技术

肉苁蓉(Cistanche deserticoLa Y.C.Ma)为列当科肉苁蓉属多年生专性全寄生草本植物。其干燥带鳞叶的肉质茎入药，是中国沙漠地区特有的名贵药材。肉苁蓉具有补肾阳、益精血、润肠通便的功能，用于肾阳不足，精血亏虚，阳痿不孕，腰膝酸软，筋骨无力，肠燥便秘。作为历代补肾助阳处方中使用频率最高的中药，肉苁蓉抗衰老方剂使用率仅次于人参居第二位补肾阳，被称为“沙漠人参”。肉苁蓉生境特殊，繁殖困难，产量有限，加上长期过度采挖，其资源匮乏，已被列为濒危物种。肉苁蓉市场价格昂贵，因此常有其近缘种及混伪品如管花肉苁蓉(Cistanche tubulosa)、沙苁蓉(Cistanche sinensis)、盐生肉苁蓉(Cistanche salsa)、列当(Orobanche coerulescens)、锁阳(Cynomorium songaricum)等被当做正品售卖。由于肉苁蓉与其近缘种、混伪品形态相似，故传统形态学方法很难鉴定。现有的肉苁蓉鉴定方法难度大、普及性差、对鉴定者有较高的专业要求。这就需要一种快速、稳定的方法对肉苁蓉进行鉴定。

发明内容

本发明的目的在于克服传统鉴别技术中存在的上述缺陷，提供一种结果准确灵敏，鉴定过程简便快速的肉苁蓉鉴定方法。

为达到以上目的，本发明的发明人在对大量的样品的筛选过程中，寻找出能够将正品肉苁蓉与混伪品进行精确区分的正品肉苁蓉的特异分子身份证序列，并提供了对肉苁蓉鉴别较为快速，简便，廉价的方法。

本发明技术方案如下：

一种肉苁蓉分子身份证，所述分子身份证中含有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。

可选地，所述分子身份证为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。

本发明还提供一种肉苁蓉的鉴定方法，其中，所述方法包括检测样品基因组DNA中是否存在本发明所述的分子身份证。

当存在所述分子身份证时，鉴定待测样品中含有肉苁蓉。

可选的，所述方法包括如下步骤：

1)以待测样品的基因组DNA为模板，扩增所述含有肉苁蓉分子身份证序列的片段；

2)对扩增产物进行测序，拼接后去除引物区获得完整的扩增片段，检测扩增片段中是否存在所述分子身份证。

当存在SEQ ID No.1所示的片段时可以判定被测样品中存在肉苁蓉成分或为肉苁蓉。相反，如果既不存在SEQ ID No.1所示的片段时，判定被测样品为伪品。

所述扩增可用PCR扩增。

本发明对于扩增(PCR)所使用的引物无特别的限制，只要能对所述分子身份证进行扩增即可，为了获得最佳的鉴定效果，扩增(PCR)所使用的引物为：RC2F 5’-ATTCACACCAAGTATCGCAT-3’(SEQ ID No.2所示的核苷酸序列)，RC3R 5’-ATTGTAGTCTGGAGAAGCGTC-3’(SEQ ID No.3所示的核苷酸序列)。

可选的，本发明所述PCR扩增反应程序为：

上述“1.5min+30s”是指每个循环多加30s。

可选的，本发明所述PCR扩增反应体系为：PCR Buffer(10×)2.5uL，Mg²⁺2uL(25mmol/L)，dNTPs混合物2uL(2.5mmol/L)，引物各1uL(2.5umol/L)，模板DNA 2uL(约30ng)，Taq DNA聚合酶1.0U，加灭菌双蒸水至25u L，进行PCR扩增。

其中，所述待测样品包括肉苁蓉及同属近缘种及伪混品。

本发明还提供用于肉苁蓉鉴定的引物及含有该引物的试剂盒，所述引物为上述SEQ ID No.2及SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。

本发明还包括上述的分子身份证或上述方法或上述引物或上述试剂盒在鉴定肉苁蓉中的应用。

本发明所提供的待测样品形式可以为原植物、药材、种子、粉末、饮片、中成药等。

本发明所提供的分子身份证和方法可以准确的将肉苁蓉与形态特性相似的伪品区分开，本发明所提供的方法适用性更广，能够检测所有能提取出DNA的肉苁蓉任何样品。因此，能够实现肉苁蓉原药材、粉末和混伪品的快速、准确鉴定。

附图说明

图1为肉苁蓉的种内align图。

图2为肉苁蓉分子身份证序列与其他物种的比对图，包含SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的比对图。